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ELISA 结果又出错?解决方案在这里

发布时间:2017-10-17 10:28 |  点击次数:

做 ELISA 实验,有过经验的童鞋们自信满满。「不就是最简单的抗原抗体反应吗?简单」是大多数童鞋的回答。但就是大家口中最简单的免疫反应,也扫倒了一大片人啊!假阳性或假阴性结果往往让这部分童鞋哭笑不得却又百思不得其解!
 

 
表着急,小编这就将师兄、师姐们的经验奉上。
 
样本处理方法:血清是最常用的 ELISA 标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种。
 
内源性物质干扰方法总结:
 
有人认为大约 40% 的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等。
 
(1)类风湿因子   人血清中 IgM、IgG 型类风湿因子(RF)可以与 ELISA 系统中的捕获抗体及酶标记二抗的 FC 段直接结合,从而导致假阳性。解决的办法是:用 F(ab)2 替代完整的 IgG、标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG 的固相吸附剂处理(将热变性 IgG 加入到标本稀释液中同样有效)、检测抗原时,可以用
β-巯基乙醇等加入到标本稀释液中,使 RF 降解。

(2)补体 ELISA 系统中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其 FC 段的补体 C1q 分子结合位点被暴露出来,使 C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。解决的办法是:用 EDTA 稀释标本、用 53℃,10 min 或 56℃,30 min 加热血清使 C1q 灭活。
 
(3)嗜异性抗体  人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将 ELISA 系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物 Ig (s) ,但加入量不足或亚类不同时无效。
 
(4)嗜靶抗原的自身抗体  抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在 ELISA 方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。
 
(5)医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体  临床开展的用鼠源性 CD3 等单克隆抗体治疗,用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术,均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体;另外,被 鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠 Ig (s) 抗体。这些病人 ELISA 测定时均可产生假阳性。解决的办法是:测定抗原时,在标本中加入足量的正常鼠 Ig (s) ,从而克服由于上述原因造成的假阳性。
 
(6)交叉反应物质 类异羟基洋地黄毒苷
、类 AFP 样物质等,是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大,但在用单克隆抗体测定抗原时,如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时,也会出现假阳性结果。
 
(7)标本中其它成分的影响  血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等,均对 ELISA 测定结果有干扰作用。
 
关于样本中内源性物质干扰的方法,介么多,有没有解决你的疑问?下期每日生物评论(Bio-review),外源性物质干扰解决方案,不见不散!

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