荧光背景知识汇总及荧光染料的 选择

荧光染料是细胞生物学等科学研究中不可或缺的重要工具，荧光滤色块是荧光显微镜中至关重要的一个部件。我们大家在操作荧光染料亮度的时候，我们可以按照上面的比较方法去比较荧光染料的亮度，那么一般荧光染料亮度怎么进行比较?

荧光染料的亮度可以用来比较不同荧光染料的荧光标记效果，通过阴性细胞群与阳性细胞群的荧光信号之间的关系来表示。但阴性细胞群的荧光信号受到信号强度、自发荧光、非特异性染色、仪器的电子噪声等多个因素相关。

荧光染料染色指数是阳性细胞群的平均荧光强度与阴性细胞群的平均荧光强度之差与阴性细胞群荧光强度标准差之间比值的一半。荧光染料染色系数只和抗体克隆与质量、荧光团纯度与质量、荧光修饰比、激光线及其功率、长通和带通滤光片、目的细胞等因素相关。

荧光染料的染色指数与荧光染料的亮度呈正相关，也就是荧光染料亮度越高，染色系数也就高。

DNA染料：
 

图1.用Cell Navigator™脂质液滴荧光测定试剂盒（Cat＃22735）和Nuclear Green™LCS1（Cat＃17540）染色的油酸处理过的HeLa细胞的荧光图像。

细胞增殖染料：

图2.用CytoTell™Green和CFSE进行的细胞增殖测定。在第0天，用CytoTell™Green或CFSE对Jurkat细胞（〜2×10⁶细胞/ mL）进行染色。在指定的那天，以1：1的比例连续通过细胞。在通过当天，在FITC通道中用ACEA NovoCyte 3000流式细胞仪测量荧光强度。连续几代人以不同的颜色代表。

细胞活力检测染料
 

图3.用CytoCalcein Violet 500（Cat＃22013）染色的活HeLa细胞图像。细胞核用Hoechst 33342（Blue，Cat＃17535）染色。

荧光标记染料

图4.将 HeLa细胞与（Tubulin +）或不与（Tubulin-）小鼠抗微管蛋白一起孵育，然后与iFluor™488山羊抗小鼠IgG缀合物（绿色，左）或AlexaFluor®488山羊抗小鼠IgG缀合物（绿色，右）。细胞核用Hoechst 33342（蓝色）染色。

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