CCK-8-做增殖细胞增殖实验哪种实验的好

  很多的科研的同学需要做增殖细胞增殖相关实验，而且想让自己的实验比较有说服力，不少童鞋都是有请教大神做哪种实验的好，是CCK-8、WST-1、MTT法、XTT法哪种实验比较有说服力？这时候问题就来了为什么将Cell Counting Kit (CCK-8)作为细胞增殖与毒性检测最佳选择？看过来人的经验之谈。

  Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），适用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

  实验原理：
WST-8属于MTT的升级产品，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。


  为什么将Cell Counting Kit (CCK-8) 作为细胞增殖与毒性检测最佳选择：
 
  如下表，CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较，结果不言而喻！
 

检测方法	MTT法	XTT法	WST-1法	CCK-8法
甲臜产物的水溶性	差（需加有机溶剂溶解后再检测）	好	好	好
产品性状	粉末	2瓶溶液	溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	现配现用	即开即用	即开即用
检测灵敏度	高	很高	很高	高
检测时间	较长	较短	较短	最短
检测波长	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
细胞毒性	高，细胞形态完全消失	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变	很低，细胞形态不变
试剂稳定性	一般	较差	一般	很好
批量样品检测	可以	非常适合	非常适合	非常适合
便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便捷

  CCK-8法细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100 μl 的细胞悬液（2000-5000 cells）。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO₂）。
2、向培养板加入10 μl 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要让孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。