细胞凋亡研究丨艾美捷 Annexin V染色方案

Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V作为一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。

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艾美捷/Annexin V 是一种在大肠杆菌中表达的重组蛋白。细胞结构的一些变化在细胞凋亡过程中发生。一个主要的变化是膜磷脂不对称性的丧失，伴随着磷脂酰丝氨酸的移位（PS）从磷脂双层的内小叶到外表面。

艾美捷/Annexin V建议的染色方案：

1.在冷PBS中清洗细胞两次

2.在冷1X ApoScreen®中重新使用电池膜联蛋白结合缓冲液（SB目录号10045-01）浓度为1 x 106细胞/mL

3.加100mL细胞悬液至5mL聚苯乙丨烯圆底管

4.加10m共轭ApoScreen®Annexin V

5.轻轻旋转每根试管，在2-8°C温度下培养15分钟，并避光

6.在不清洗的情况下，添加~380m冷1X ApoScreen®Annexin 结合缓冲液到每根管

7.加10mApoScreen®的L7-氨基放丨线丨菌素D（7-AAD；SB分类号10042-01）或ApoScreen®碘化丙啶（PI；SB类别号。

艾美捷/Annexin V储存方式：

1.纯化的（UNLB）ApoScreen®Annexin V 以0.1mg纯化的重组蛋白形式从PBS中冻干。储存材料在重构前的-20°C温度下。用1.0毫升的dH2O重新配制。将再造材料储存在2-8°C的温度下。

2.荧光素（FITC）、生物素（BIOT）和菁5（CY5）ApoScreen®附录V结合物在1.0毫升的溶液中作为100次试验提供ApoScreen®Annexin V 结合缓冲液。在2-8°C下储存。

3.R-藻红蛋白（PE）和别藻蓝蛋白（APC）ApoScreen®在1.0毫升PBS/NaN3中，以100次试验的形式提供膜Annexin V结合物和稳定剂。在2-8°C下储存。不要冷冻！

4.保护荧光色素结合物不受光照。如果按照指示储存，试剂在标签上显示的时间内是稳定的。

来源：https://www.amyjet.com/products/10040-01.shtml