Cytoskeleton 艾美捷代理 Vav2蛋白实验原理

人类Vav2蛋白的DH结构域已在细菌表达系统中产生。它含有一个6xHis标记在其氨基末端用于纯化。注册号为NM001134398.1。GE06的分子量约为25kDa。Vav2 DH蛋白以白色冻干粉末的形式提供。蛋白质纯度通过在4-20%聚丙丨烯丨酰胺梯度凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白质的密度测定来确定。Vav2 DH蛋白的纯度约为80%。

Cytoskeleton/艾美捷Vav2蛋白是一种对Rac1有选择性的鸟嘌呤交换因子，在多种条件下介导Rac1激活，并与胃肿瘤以及细胞体积控制和神经轴突延伸有关：

1.Vav2 GTP/GDP交换活性抑制剂的研究

2.Vav2 DH结构域结合蛋白的鉴定

3.不同GTP酶对Vav2-GEF活性的研究

Cytoskeleton 覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒。

Cytoskeleton/艾美捷Vav2蛋白生物活性测定：

Vav2 DH的生物活性可以通过其催化Rac1上核苷酸交换的能力来确定，使用Bodipy GDP的核苷酸交换试验检测过量的GDP或GTP。Rac1蛋白质通过添加过量的EDTA预加载Bodipy FL GDP，例如，反应中每mmol Mg2+离子添加0.7 mmol EDTA。然后以解离分析的形式使用该子储备溶液，这表明与未标记的核苷酸竞争交换位点。反应通过485nm Ex/535nm Em下的荧光测量进行监测。严格的质量控制确保在存在0.8µM Vav2 DH的情况下，Bodipy GTP或mant GTP的交换率至少提高五倍。

方法：

1.将Vav2小瓶放在冰上，用冰冷交换缓冲液稀释至0.30微克/微升（8微升）。

2.用冰冷交换缓冲液将Rac蛋白稀释至1.25µg/µl（50µM）。

3.在新鲜的15毫升Falcon管中加入以下成分，并通过移液管或轻轻旋涡充分混合：

每口井的成分微升交换缓冲区75

50µM Rac 5

8µM Vav2 10

注：对于总混合物体积，将每个孔的试剂体积乘以实验中的孔数，再加上20%的体积以计算移液损失。

4.在室温（RT）下培养20分钟。

5.通过添加10µl（每孔）50 mM MgCl2锁定核苷酸。

6.设置荧光计，激发波长为485 nm+/-15 nm，发射波长为525 nm+/-15 nm。

7.将预加载的混合物等分到指定的孔中，并将平板放入荧光计中。

8.在5个周期（150秒）后，将程序置于保持或暂停状态，然后卸下平板。

9.移取10µl a）5 mM GTP溶液，b）小化合物，c）测试蛋白质，d）4 mM EDTA（+ve交换对照）或e）稀释缓冲液（阴性对照）于各孔中，并立即上下移液两次，然后继续读取20分钟。

10.完成动力学方案后保存读数。通过将数据减少到最大斜率（使用12个点）或Vmax，并使用读板器附带的软件，可以计算汇率。交换曲线可以通过导出到Microsoft Excel来实现。

艾美捷科技是Cytoskeleton的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Cytoskeleton-china-distributor.shtml