预激活APC-Cy7串联的功能应用

别藻蓝蛋白 (APC) 是一种从蓝绿藻螺旋藻中分离出来的藻胆蛋白。与其他藻胆蛋白一样，APC 是荧光的，具有J高的吸收率和高量子效率。它是一种可以通过常规蛋白质交联技术轻松与抗体和其他蛋白质连接而不改变其光谱特性的蛋白质。APC-Cy7 是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰在 651 nm，发射峰在 ~780 nm。

艾美捷预激活APC-Cy7串联 以促进 APC-Cy7 与抗体和其他蛋白质（如链霉亲和素和其他二级试剂）的串联偶联。该预激活APC-Cy7串联已准备好进行偶联，与传统繁琐的基于 SMCC 的偶联化学相比，其产量要高得多。

图：艾美捷预激活APC-Cy7串联 使用 Buccutite™ FOL（已提供）进行了预修饰。使用抗体（或其他蛋白质）时采用 Buccutite™ MTA（作为免费样品提供）进行修饰，得到 MTA 修饰的蛋白质（例如抗体）。MTA 修饰的蛋白质很容易与 FOL 修饰的 APC-Cy7（已提供）反应，以比 SMCC 化学方法高得多的产率产生所需的 APC-Cy7-抗体偶联物。该预激活APC-Cy7串联 与 MTA 改性的生物聚合物的反应浓度远低于 SMCC 化学品。

使用 Buccutite™ MTA 制备预活化抗体

在 DMSO 中复溶 Buccutite™ MTA，浓度约为 10 mg/mL。

注意     请将未使用的 Buccutite™ MTA 储存在 -20 °C 下，最多可使用两次冻融循环。

在 pH = 8.5-9.0 缓冲液中制备目标抗体 (Ab)，浓度高于 1 mg/mL。

以 8 - 10 µg Buccutite™ MTA/100 µg Ab 的比例将 Buccutite™ MTA 添加到 Ab 溶液中。

充分混合并在室温下反应 60 分钟，在反应过程中旋转。

使用脱盐柱纯化反应混合物以去除未反应的 Buccutite™ MTA，并将缓冲液更换为 PBS 或您选择的缓冲液。

收集 Buccutite™ MTA 激活 Ab，并以原始起始量的 70% 产率估算浓度。

艾美捷预激活APC-Cy7串联参考文献（部分）：

Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120

Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.

Journal: J Biol Chem (2006): 8573

Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy

Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.

Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016

Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin

Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.

Journal: Biophys J (2004): 2598

Isolation and characterisation of phycobili

来源：https://www.amyjet.com/products/AAT-2587.shtml