Worthington艾美捷组织解离指南

组织解离/原代细胞分离和细胞收获是酶在组织培养研究和细胞生物学研究中的主要应用。  尽管多年来在这些应用中广泛使用酶，但它们在解离和收获中的作用机制尚不清楚。  因此，选择一种技术而不是另一种技术通常是武断的，并且更多地基于过去的经验，而不是对方法为何有效以及哪些修改可以带来更好结果的理解。

Worthington 艾美捷细胞分离程序的目标是J大限度地提高功能上可行的解离细胞的产量。  有许多参数可能会影响任何特定程序的结果，包括但不限于：

1.   组织类型

2.   原产地物种

3.   动物的年龄

4.   基因改造（基因敲除等）

5.   使用的解离介质

6.   使用的酶

7.   使用的任何粗酶制剂中的杂质

8.   所用酶的浓度

9.   温度

10. 孵化时间

前四项通常不是选择问题。 为了获得合适的结果，还是根据经验定义其他变量条件。

研究人员在科学文献中搜索有关理想酶和组织解离的最佳条件的信息时，经常会遇到相互矛盾的数据。  大部分变化源于细胞外基质的复杂性和动态性，以及在细胞分离应用中使用相对粗糙、不确定的酶制剂的历史。  此外，细胞外基质由多种蛋白质、糖蛋白、脂质和糖脂组成，所有这些物质的丰度因物种、组织和发育年龄而异。  常用的粗酶制剂如 Pronase、NF 1:250 和胶原酶含有多种浓度不同的蛋白酶，以及多种多糖酶、核酸酶和脂肪酶。

本指南总结了我们关于这些酶如何完成组织解离和细胞收获的“常规”操作的知识，描述了标准实验室程序，提供了建立细胞分离方案的合乎逻辑的实验方法，并列出了许多组织特异性参考文献。

关于Worthington 艾美捷组织解离常见的部分问题解答：

1.什么是胶原酶 (CLS) 可接受的酶稀释剂？

胶原酶可以直接溶解在平衡盐溶液或选择的缓冲液中。它应该通过 0.22um 孔径的膜进行无菌过滤。其适合pH范围为7-9。

2.新生儿心肌细胞分离系统（NCIS 试剂盒）可以用于成人吗？

NCIS 试剂盒专门为五个独立的组织解离而包装，每个包含多达十二个新生大鼠心脏。NCIS 协议可在www.worthington-biochem.com/NCIS/default.html在线获得。成年大鼠心肌细胞通常需要灌注，即。Langendorf 灌注系统和II 型胶原酶。

3.Worthington 艾美捷Hank's、Earle's 和 Leibovitz L-15 Media 的数量是多少？

NCIS（新生儿心肌细胞分离系统）试剂盒中提供无菌不含钙和镁的 Hank 平衡盐溶液。

NCIS 套件还包含一袋 Leibovitz L-15 Media Powder。将袋中的全部内容物重新溶解到含有 800 毫升细胞培养级水的烧杯中。用额外的 100 毫升冲洗粪便 2-3 次。使总体积达到 1 升并通过 0.22 微米孔径的过滤器过滤。装有 1 升 Leibovitz L-15 Media 粉末的袋子是目录号LK003250。

Worthington专注于生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。其核心酶包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml