Nanoprobes Nanogold标签：助力显示SAP-1 的分布和功能

当前Genes to Cells上发表了一篇论文. 作者使用 Nanogold 标记和 HQ Silver 开发来帮助阐明胃癌相关蛋白酪氨酸磷酸酶 1 (SAP-1) 的功能及其与胃肠道癌的关系。SAP-1 (PTPRH) 是一种受体型蛋白酪氨酸磷酸酶 (RPTP)，在其细胞质区域具有单个催化结构域，在其细胞外区域具有 III 型纤连蛋白样结构域。直到最近，这种 RPTP 的细胞定位和生物学功能仍然未知。

在这项研究中，作者产生了一种针对 SAP-1（克隆 123）的单克隆抗体 (mAb)，然后使用二次免疫荧光和 艾美捷 Nanoprobes Nanogold 标记来研究这种蛋白质在小鼠胃肠道内的分布。

分辨率优势：

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab' 与常规 5 nm 胶体金-IgG 探针的尺寸比较，显示了整体探针尺寸和金与目标的距离。由于其位于铰链区，Nanogold 在结合时更靠近目标，但不会阻碍或干扰结合。此外，其较小的尺寸允许更密集的标记，并有助于渗透到组织中并获得受阻抗原。

用这种 mAb 进行的免疫印迹分析揭示了大约 250-kDa SAP-1 蛋白在肠道中的显着表达，以及在睾丸中的低水平表达。十二指肠或空肠中的SAP-1含量明显高于胃或结肠。对 SAP-1 的 mAb 的免疫组织荧光显示 SAP-1 定位于肠上皮细胞的顶端表面，类似于埃兹蛋白或碱性磷酸酶，已知这两种酶都定位于肠上皮的微绒毛。在鬼笔环肽显示的 F-肌动蛋白显着染色上方立即检测到 SAP-1 免疫反应性，这可能对应于肠上皮细胞刷状缘处的末端网。

对于免疫电子显微镜研究，通过腹膜内 (ip) 注射 25 mg/kg 重量的戊ba比妥钠对小鼠进行麻醉，然后在 0.1 M er甲丨胂酸钠缓冲液 (pH 7.4) 中经心灌注 2% PFA 和 2.5% 戊er醛。取出组织并在相同的固定剂中在 4°C 下浸泡 1 小时，然后在 4°C 下与相同缓冲液中的1% OsO 4一起孵育 1 小时。然后将它们脱水并嵌入 Epon。对于免疫 EM，组织样品在室温下通过在含有 4% 多聚甲醛 (PFA) 和 1% 戊er醛的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 中浸泡 2 小时进行固定。使用 mAb 对小鼠 SAP-1 和Nanogold 标记的 Fab' 山羊抗大鼠 IgG制备和处理 10 µm 厚的冷冻切片进行免疫染色. 使用HQ Silver Enhancement 套件增强信号。银增强完成后，切片再次用1% OsO 4和0.1% 亚铁qing化钾固定，最后包埋在Epon中。然后制备超薄切片（90 nm），用乙酸双氧铀和柠檬酸铅染色，并用 JEM 1010 电子显微镜（JEOL）检查。

标记模式分析证实SAP-1蛋白定位于胃肠上皮细胞刷状缘微绒毛；小鼠 SAP-1 mRNA 主要局限于胃肠道。其他实验发现，SAP-1 在小鼠肠道中的表达在胚胎发育期间最小，但在出生后显着增加，与肠上皮细胞的分化一致。SAP-1缺陷小鼠的肠上皮形态没有明显变化。然而，SAP-1 消融抑制了腺瘤性结肠息肉基因杂合突变小鼠的肿瘤发生，导致大腺瘤（> 2 mm）减少。这些结果表明 SAP-1 是一种微绒毛特异性 RPTP，可调节肠道肿瘤发生。

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab' 参考文献：

Sadakata, H.; Okazawa, H.; Sato, T.; Supriatna, Y.; Ohnishi, H.; Kusakari, S.; Murata, Y.; Ito, T.; Nishiyama, U.; Minegishi, T.; Harada, A., and Matozaki, T.: SAP-1 is a microvillus-specific protein tyrosine phosphatase that modulates intestinal tumorigenesis. Genes Cells, 14, 295-308 (2009).

Abstract (courtesy of Wiley Interscience).

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来源：https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml