Jackson科普：如何选择一抗&抗体验证的注意事项

一抗是用于检测目的蛋白的试剂。在膜封闭后添加，一抗与感兴趣的蛋白质特异性结合。将膜与一抗在室温下（通常使用 1 小时）在摇杆或摇动平台上孵育，但在 4°C 下过夜孵育也可能有效。孵育后，用一抗洗涤膜以去除任何过量和未结合的抗体。这J大限度地提高了该技术的灵敏度并提高了信噪比。那么如何选择一抗，以及一抗的宿主种类有哪些，这些都是接下来Jackson ImmunoResearch公司的主题内容。

Jackson公司选择一抗的注意事项：

市面上有多种不同形式、克隆性和特异性的一抗，这些是选择合适试剂时需要考虑的重要因素。

1.特异性——免疫原

用于产生抗体的免疫原类型显着影响抗体对靶蛋白的特异性。选择针对不合适或质量差的免疫原产生的抗体将导致不可靠且可能无法重现的结果。应注意选择针对已充分表征的免疫原产生的抗体。

2.肽

合成肽免疫原很少折叠成天然蛋白质的类似三级结构。此外，除非在合成过程中添加到肽中，否则它们不会表现出任何翻译后修饰。因此，使用肽产生的抗体可用作蛋白质印迹的有用试剂，因为由于样品处理过程中的变性和还原，靶蛋白具有线性化的表位。当抗体需要区分具有高度保守氨基酸序列的两种蛋白质时，肽也可用作免疫原。在这些情况下，产生到差异区域的肽增加了制造差异抗体的可能性。

3.天然蛋白质

如果将纯化的蛋白质用作免疫原，则针对它们产生的抗体可能无法识别蛋白质印迹中变性蛋白质的线性表位。一些使用天然蛋白质产生的抗体只能识别蛋白质表面的天然氧化构象表位。对于单克隆抗体尤其如此。

一抗的宿主种类

理想情况下，一抗应在与待分析样品不同的物种中产生。这是为了避免二抗检测样品中的免疫球蛋白（如果存在）。例如，来自小鼠的样本可能含有小鼠免疫球蛋白。如果一抗也在小鼠体内制备，则抗小鼠二抗不仅可以检测与目标蛋白结合的一抗，还可以检测小鼠样品中免疫球蛋白重链和轻链的结合。当目标蛋白质的分子量与重链 (50 kDa) 或轻链 (25 kDa) 相似时，这可能会特别成问题，因为目标蛋白质和内源性小鼠 IgG 之间的区分变得不可能.

Jackson公司单克隆和多克隆一抗

单克隆抗体和多克隆抗体均可用于蛋白质印迹。单克隆抗体由单个 B 细胞克隆产生，并产生对一个表位特异的抗体。而多克隆抗体是由不同的 B 细胞谱系产生的，因此包含识别抗原上不同表位的多个克隆。这两种类型都有优点和局限性（如下表所示）。

Jackson公司抗体验证的注意事项：

每个一抗必须按预期执行，在实验条件下检测感兴趣的蛋白质。理想情况下，将为每个新的实验设置验证每个一抗和蛋白质对的实验适用性。在验证过程中应解决一抗性能的四个方面。这些是：

1.对感兴趣的抗原/蛋白质的特异性

2.在实验条件下对抗原的特异性（天然或变性）

3.对抗原的亲和力

4.再现性

Jackson公司专注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究，服务领域覆盖各大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson公司的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml