Jackson丨选择合适的亲和纯化二级抗体之考虑补充免疫试剂

考虑补充免疫试剂——如何选择合适的亲和纯化二级抗体？本文为第7部分内容：考虑补充免疫试剂。

根据技术的不同，可能需要其他免疫试剂来优化分析。阻断剂、实验控制和信号增强分子有多种形式。链霉亲和素试剂可用于生物素化抗体。

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使用免疫技术的实验方案通常可以通过优化使用阻断剂、稀释剂和对照来改进。

在开发免疫技术时，考虑结果分析很重要。添加正确的封闭试剂和实验对照可以提高分析性能和解释。在生成用于发布的数据时，包含积J和消J控制非常重要。

免疫试剂

Jackson ImmunoResearch拥有多种免疫试剂，旨在提高分析性能和分析的简便性。本指南重点介绍了以下免疫反应物。

正常血清

ChromPure 正常血清中的纯化蛋白质

单价Fab片段亲和力纯化抗体

无IgG、无蛋白酶牛血清白蛋白

正常血清

正常血清是从非免疫动物获得的，因此没有检测到任何特定抗原。强烈建议将PBS（或类似缓冲液）中稀释至5%（v/v）的正常血清作为阻断剂，以减少非特异性、保守序列的背景和/或Fc受体结合。好的结果是使用与标记抗体来自同一宿主的稀释正常血清，在添加一级抗体之前用作单独的孵育步骤。

ChromPure 正常血清中的纯化蛋白质

ChromPure 蛋白质主要用作初级或次级抗体的实验对照。它们也可用作Western blotting、IHC和IF.ChromPure的封闭试剂™ 蛋白质来源于非免疫动物的血清，不识别任何已知抗原。它们是使用多种色谱技术制备的，以产生浓度高达20 mg/ml的无污染分子的材料，使其成为最敏感分析的理想实验对照品。ChromPure  许多物种的蛋白质有多种形式，包括全免疫球蛋白、F（ab’）2和Fab片段。

还有人IgM、血清IgA和其他蛋白质。Jackson ImmunoResearch为其提供了广泛的偶联物，包括一系列荧光染料和报告酶，允许分离非特异性相互作用产生的信号。

单价Fab片段

亲和纯化抗体Fab片段可用于阻断内源性免疫球蛋白，以减少背景染色并双重标记来自同一宿主物种的一级抗体。以下示例显示了在小鼠组织上使用小鼠初级抗体时，如何使用Fab片段阻断内源性免疫球蛋白。

无IgG、无蛋白酶牛血清白蛋白

牛血清白蛋白（BSA）被广泛用作稀释抗体的载体蛋白，并在免疫分析和免疫检测协议中用作一般蛋白阻断剂。如果BSA是您的分析所需的稀释剂或封闭试剂，那么使用适合此目的的BSA是很重要的。

大多数BSA产品，包括那些市场上销售的没有可检测到的IgG的产品，都被低水平的牛IgG污染。

牛IgG与山羊、绵羊和马IgG有许多表位，可以成为针对这些物种的二级抗体的靶点（牛抗羊IgG除外）。这也可能与其他与牛IgG交叉反应的抗体发生。这种相互作用可能导致抗体活性丧失和/或背景增加。背景可能来自粘性、可溶性免疫复合物，或来自污染牛IgG引起交叉反应标记的二级抗体的非特异性结合。

Jackson ImmunoResearch艾美捷 牛血清白蛋白不含IgG和蛋白酶。它不包含污染的IgG，这可以缓解与许多商业化高纯度BSA制剂相关的常见免疫分析问题。不含IgG的BSA是一种纯蛋白质，由去离子水冷冻干燥而成，包装尺寸为10 g、50 g和250 g。

文献参考：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland Press. London.

Kalyuzhny A (2016) Immunohistochemistry – Essential Elements and Beyond. Springer International Publishing Switzerland.

Mann, M. & Jensen, O.N. (2003) Proteomic analysis of post-translational modifications. Nat. Biotechnol. 21, 255-261.

Jackson ImmunoResearch专注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究，服务于大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml