艾美捷科技有限公司
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Jackson丨艾美捷Jackson直接和间接免疫印迹法方案
人阅读 发布时间:2022-09-30 15:18
Western blotting是一种稳健的技术,它使用抗体检测电泳分离后固定在印迹膜上的蛋白质。该技术可以直接或间接执行。根据实验要求,每种方法都可以提供优势。一旦蛋白质被凝胶电泳分离并转移到吸墨纸膜上,蛋白质吸墨纸可以分一步或两步进行。
Jackson丨艾美捷直接-一步法:
在直接检测方法中(图1(A)),直接结合报告酶或荧光染料的一级抗体用于在单个培养步骤后检测印迹膜上的蛋白质抗原。虽然这种一步法更快,但并没有广泛使用。图1(B)说明了直接结合一级抗体的问题之一,报告分子可以阻断一级抗体中的抗原结合区域,从而阻止对抗原的良好识别,并导致灵敏度降低。过量的一次可补偿这种影响,但可能导致再现性差和背景增加。
Jackson丨艾美捷间接-两步法:
Western印迹的两步间接检测方法避免了对抗原检测的干扰。未标记的一级抗体与抗原结合在印迹膜上形成复合物。清洗后,用与报告酶或荧光团结合的二级抗体培养印迹。多个二级抗体与一级抗体上的表位结合,形成标记的抗原抗体复合物(图1(C))。虽然间接法需要更多的洗涤和培养步骤,但与直接法相比,它具有许多优点,包括信号放大和灵活性。
图1:(A) 直接结合的一级抗体结合结合在膜上的抗原。(B) 由于报告酶或荧光团可以结合到抗原结合区并降低抗体对其靶点的亲和力,所以直接结合的一级抗体和结合在膜上的抗原结合较差。使用辅助设备可以消除这种情况。(C) 间接方法-多重共轭二级抗体与未标记物一级抗体结合。
直接和间接检测方法适用于Western blotting,但也可能与其他技术相关,如IHC/ICC、ELISA和流式细胞术。
Jackson直接和间接免疫印迹法文献参考:
Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London
Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain
Jackson ImmunoResearch专注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究,服务于大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
来源:https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml