Nanoprobes 艾美捷LI Silver 增强协议

Nanoprobes 艾美捷LI Silver：

用银色增强剂进行凝胶染色：LI Silver

具体：仅开发Nanogold®标记带

快速：1-5分钟

敏感：比普通凝胶染色更敏感

可直接用于凝胶或印迹转移

Nanoprobes艾美捷1.4纳米的Nanogold®颗粒可以用银进行显影，使其成为肉眼可见，从而将信号放大数千倍。如果你使用了单马来酰亚胺纳米金、单NHS纳米金®或单氨基纳米金®来标记蛋白质或其他分子，那么这些可以很容易地在凝胶上使用银增强技术进行分析和检测。以下是在凝胶或印迹上检测Nanogold®标记的条带的方案。

用Nanoprobes 艾美捷Nanogold®标记后，通过柱色谱法、蔗糖梯度法或其他纯化方法去除未结合的金颗粒。在样品中留下多余的游离Nanogold®会干扰预期的凝胶染色。

像往常一样运行凝胶，但有两个预防措施。

A) Nanogold®会被β-巯基乙醇（或DTT）降解，所以样品不能与还原剂混合，即必须运行非还原性凝胶。其他成分（SDS等）的正常浓度是可以接受的。

B) 样品不能被加热。通常样品在加载到凝胶前会在SDS中煮沸。由于Nanogold®在50℃以上会被降解，所以建议不要加热。这通常不是一个限制，因为大多数样品无需加热即可获得正常的凝胶图案。

如果需要，可以将凝胶电转到硝酸纤维素上，尽管这不是必须的。

用多次更换的去离子水冲洗凝胶。由于银显影剂是由卤化物沉淀的，所以必须去除微量的氯化钠。

将凝胶或印迹放在一个合适的盘子里，涂上足够的新鲜制备的LI银（目录号2013）以覆盖凝胶。LI银是通过混合等量的A和B成分制备的。不要使用通常的凝胶银染色剂，它们与LI银完全不同，不能有效地显影Nanogold®。

注意带状物的发展，它应该呈现棕黑色。没有进入凝胶的金的聚集物或少量的游离金可能会产生背景染色。通常的显影时间为1-5分钟。过长的显影时间（大于30分钟）会导致一些非特异性的背景自核染色。

当达到最佳染色效果时，用去离子水冲洗，停止显影。最终染色的凝胶现在是一个永丨久的记录。

为了对所有条带进行比较和观察，可以运行一个重复的凝胶，用库马西蓝或凝胶银染色剂进行染色。

由于Nanogold®颗粒的重量增加（约15,000），Nanogold®标记的分子在凝胶上通常会高出约15,000 MW。因此，标记的和未标记的分子被分开，它们的比例可以通过通常的凝胶染色（Coomassie或凝胶银染色）来估计，凝胶染色显示总的蛋白质含量。

相关文献：

Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, and D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

Wilkens, S. and Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html