艾美捷脂肪生成测定试剂盒所需材料和染色程序

3T3-L1细胞是一种特征良好的细胞系，通常用于研究脂肪细胞的分化。3T3-L1细胞已被广泛用于研究胰岛素诱导的葡萄糖摄取和肥胖发展机制。该模型系统极大地促进了对脂肪生成的分子基础和信号通路的理解。在终末分化过程中，成纤维细胞样前脂肪细胞经历一系列形态学和生化变化，最终积聚脂滴。这些体外分化的脂肪细胞与体内脂肪细胞具有相似的形态。使用这种脂肪生成模型的广泛研究揭示了许多因素，包括转录因子C/EBP家族和调节脂肪生成的核受体PPARγ。3C/EBP和PPARγ表达的增加协同驱动脂肪生成表型的产生和维持所必需的基因的表达。这些基因包括脂肪酸结合蛋白4（aP2）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、11β-HSD1、脂肪酸合成酶（FAS）、酰基CoA羧化酶、Glut4和胰岛素受体。随着使用该模型的研究产生新发现，该列表有望扩大。

艾美捷脂肪生成测定试剂盒所需材料：

1.脂滴测定固定剂（10X）-（编号10008981）

通过将整个小瓶加入90 ml PBS（pH 7.2）制备工作溶液。

2.脂滴含量测定清洗液（项目号600044）

3.脂滴测定油红O工作溶液（项目号600045，库存）

将储备溶液在水中稀释至60%，制备工作溶液；即六份储备溶液和四份蒸馏水。使用前，用0.25-0.45μm注射器过滤器过滤此溶液。

4.脂滴测定染料提取溶液（项目号600046）

以下方案适用于96孔板。对于其他尺寸的板，应相应调整添加到每个孔的溶液体积。在加入染料提取溶液并在轨道振动器上轻轻摇动板后，可将提取物转移到96孔板上，并使用板读数器或玻璃管测量吸光度，并使用分光光度计读取。

染色程序（在室温下执行所有步骤）：

1.从井中取出大部分培养基。

2.向每个孔中加入75μl稀释的脂质液滴测定固定剂（见第10页）

并孵育15分钟。

3.用100μl洗涤溶液洗涤孔两次，每次五分钟。

4.让井完全干燥（将板放在通风罩下有助于加速干燥）。

5.向所有油井（包括

背景孔不含细胞并孵育20分钟。

6.去除所有油红O溶液，用蒸馏水清洗细胞几次，直到水不含可见的粉红色。

7.用100μl洗涤溶液洗涤孔两次，每次五分钟。此时，可以拍摄显微镜图像来观察分化细胞中粉红色到红色的油滴染色。

8.让井完全干燥（将板放在通风罩下有助于加速干燥）。

9.向每个孔中加入100μl染料提取溶液。轻轻混合15-30分钟，用96孔板读数仪读取490-520 nm处的吸光度。

艾美捷脂肪生成测定试剂盒参数说明：

中文名称：脂肪生成分析试剂盒 -1个试剂盒

英文名字：Adipogenesis Assay Kit

编号：10006908-1

规格：1ea

起源：动物/牛

存储：4摄氏度

稳定性：≥ 1年

艾美捷脂肪生成测定试剂盒相关文献：

1.Camp, H.S., Ren, D., and Leff, T. Adipogenesis and fat-cell function in obesity and diabetes. Trends in Molecular Medicine 8(9), 442-447 (2002).

2.Spiegelman, B.M. and Flier, J.S. Adipogenesis and obesity: Rounding out the big picture. Cell 87, 377-389 (1995).

3.Tong, Q. and Hotamisligil, G.S. Molecular mechanisms of adipocyte differentation. Reviews in Endocrine & Metabolic Disorders 2, 349-355 (2001).

4.Prusty, D., Park, B.-H., Davis, K.E., et al. Activation of MEK/ERK signaling promotes adipogenesis by enhancing peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) and C/EBPα gene expression during the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes. J. Biol. Chem. 277(48), 46226-46232 (2002).

5.Vidal-Puig, A., Jimenez-Linan, M., Lowell, B.B., et al. Regulation of PPARγ gene expression by nutrition and obesity in rodents. J. Clin. Invest. 97, 2553-2561 (1996).

6.Scherer, P.E., Lisanti, M.P., Baldini, G., et al. Induction of caveolin during adipogenesis and association of GLUT4 with caveolin-rich vesicles. J. Cell Biol. 127, 1233-1243 (1994).

7.Thompson, G.M., Trainor, D., Biswas, C., et al. A high-capacity assay for PPARγ ligand regulation of endogenous aP2 expression in 3T3-L1 cells. Anal. Biochem. 330, 21-28 (2004).

来源：https://www.amyjet.com/products/10006908-1.shtml