Advanced Targeting Systems 艾美捷Fab pHast小鼠说明

艾美捷Advanced Targeting Systems/ATSbio Fab pHast小鼠用于定量检测一级抗体的特异性、结合和内化，1天内即可获得结果。Fab pHast小鼠通过与pH依赖性荧光报告子交联的二级抗体与您的主要小鼠抗体结合。这种荧光报告物会随着其周围环境的pH值变得更酸性而增加强度，这在暴露于细胞内的环境时很明显。成功的检测将通过荧光检测板读数器提供EC50，照亮您的潜在抗体。

艾美捷Advanced Targeting Systems /ATSbio Fab pHast小鼠可在1天内对小鼠主要抗体的特异性、结合性和内在化进行定量测试。该二级缀合物用于评估一级抗体内化的潜力。制作1.5毫升“Fab pHast加标溶液”将使用约43微克Fab pHast。这是假设500 nM的加标溶液，并在96孔板上进行测定，这是方案中的建议量。这足以在8种不同浓度的抗体下测试六份（6个数据点）的1种抗体。

图2：Fab pHast小鼠与192-IgG:HEK-293细胞，用p75神经营养素转染在96孔板中以20000个细胞/孔接种受体并允许其粘附过夜。10 nM的192 IgG抗体（Cat.#AB-N43）在室温下孵育图1：Fab pHast小鼠的pH响应：荧光（RFU）为显示为Fab pHast小鼠（Cat.pH-02). 酸性越强荧光，而碱性pH几乎没有荧光。将1µl或0.9µg添加到99µl 50mM中底部读数为96的不同pH值的磷酸钾-井板。在平板混合器上轻轻混合平板5分钟，并在Spectra Max上读取双子座EM（Ex:532nm/EM:560nm）。

温度与30nM Fab pHast小鼠（Cat.#PH-02）持续20分钟。Fab pHast结合抗体为然后加入细胞中，在平板上轻轻混合2分钟搅拌机。将细胞孵育过夜内部化，尽管可以检测到内部化几小时内。用PBS代替培养基更高的灵敏度，然后对细胞进行分析使用Y3放大20倍的荧光显微镜徕卡滤镜立方体。

艾美捷Advanced Targeting Systems/ATSbio Fab pHast小鼠特异性和制备：

该二级缀合物识别小鼠抗体。Fab pHast是山羊抗鼠单价抗体和pH依赖性荧光报告物的化学偶联物。用于制造Fab pHast的抗体小鼠是针对小鼠IgG重链和轻链的亲和纯化的多克隆抗体。这个本品中使用的抗体将在免疫球蛋白类及其亚类之间发生交叉反应因为它们共享相同的轻链（kappa或lambda）。pHast荧光染料具有激发波长532nm，发射最大值为560nm。

使用和储存：

Fab pHast小鼠产生对您的初级细胞的特异性、结合性和内在化的定量测试小鼠抗体，结果在1天内。该次级共轭物用于评估初级抗体内化。材料可能有很多不同；工作稀释度必须由最终用户确定。如果是一个新的批次，您必须在开始完整的实验方案之前评估适当的工作稀释度。使用前轻轻旋转材料；5-10秒的缩微胶片就足够了。材料应为储存于2-6°C，避光。您可以添加稳定剂，如BSA（1-10 mg/ml）或甘油稳定性和/或防腐剂如叠丨氮丨化钠（2mM）。在这些条件下，材料具有稳定的保质期。

Advanced Targeting Systems(ATSbio)主要研究领域包含神经靶向毒素，神经生物学研究方面的抗体/蛋白，靶向剂内化水平检测工具等。艾美捷科技是ATSbio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Advanced-Targeting-Systems.shtml