艾美捷钥孔血蓝蛋白KLH使用说明

钥孔血蓝蛋白KLH是通过添加磺基SMCC交联剂活化的马来酰亚胺。主动钩子™KLH快速偶联到肽和蛋白质上的游离巯基。这种活化的载体蛋白节省了时间和金钱，因为不需要单独的交联剂，反应是一步反应。

锁孔帽贝血蓝蛋白是一种广泛使用的载体蛋白，因为它的分子量大（4.5x105-1.3x107Da聚集体）和大量伯胺，可以与交联剂反应以偶联肽。

钥孔血蓝蛋白KLH有10毫克小瓶或我们的OneQuant™一次性使用线为8 x 2mg小瓶。

艾美捷钥孔血蓝蛋白KLH#GBS-786-094是KLH（锁孔帽贝血蓝蛋白）的一种预激活形式，具有被磺基SMCC激活，并准备通过半胱氨酸残基。KLH是从软体动物圆纹苏云虫中分离出来的，属于一个巨大的呼吸蛋白家族，血蓝蛋白，发现于软体动物和节肢动物。KLH的大分子量（400‐3000kD）使其成为一种优异的免疫原的选择。钥孔血蓝蛋白 KLH共有300‐600个反应基团可用于连接和制作ActiveHOOK™ KLH是一种出色的载体蛋白。OneQuant钥孔血蓝蛋白 KLH以OneQuant冻干形式提供™ 格式，2mg/瓶。

重要信息：

a.为了确保完全耦合，我们建议使用推荐数量的试剂，因为这些试剂向其上的马来酰亚胺基团提供摩尔过量的肽载体蛋白。

b.对于不溶于1X Optimizer缓冲液III的肽，我们建议使用二甲基亚砜（<30%）。

c.该试剂盒设计用于通过游离巯基残基。埃尔曼试剂（类别号BC87）可以测定游离巯基。如果被氧化，蛋白质和肽可以被0.1-0.5%的β-巯基乙醇（类别号BC98）、5‐50mM DTT（类别号786‐227）或1‐10mM TCEP（类别号786‐230）。还原后，必须去除还原剂，我们建议

使用凝胶过滤旋转柱（SpinOUT™，目录号786‐170786‐171）。此方法不是适用于小肽（MW<1500）。

协议

1.溶解一小瓶（2mg）OneQuant™ 活动挂钩™ 500μl 1X优化器中的KLH缓冲器™ III或适用于巯基反应的缓冲液。

2.使用前立即溶解2-10mg含巯基的肽或蛋白质在500μl 1X Optimizer缓冲区中™ III或适用于巯基反应的缓冲液。

3.将含巯基的肽添加到ActiveHOOK中™ KLH。翻转混合管4-5次。

4.在室温下培养30分钟。混合反应物并孵育在4°C下再加热1小时。

5.用合适的储存缓冲液（如PBS）透析反应1-2小时2-3改变透析缓冲液，以去除未偶联的肽。

6.透析后，载体蛋白-肽缀合物即可使用。承运人蛋白质-肽缀合物可以储存在-20°C下以备日后使用。

将‐NH2修饰为‐SH用于缺乏巯基的蛋白质和肽

1.将待巯基化的肽或蛋白质悬浮在50mM三乙丨醇丨胺中，0.15M NaCl，1mM EDTA pH8.0。

2.加入3-4倍摩尔过量的特劳特试剂（Cat#BC95）。

3.在氮气下，在室温下培养反应45分钟。

4.使用SpinOUT从未反应的Traut试剂中分离巯基化产物™列（SpinOUT™ GT‐600（目录号786‐170））或透析

来源：https://www.amyjet.com/products/GBS-786-094.shtml