ALPCO-c-肽ELISA现货促销中

ALPCO C肽ELISA用于定量测定人血清和血浆中的C肽。

艾美捷c-肽ELISA（ALP-80-CPTHU-E01.1）检测原理：

ALPCO C肽ELISA是一种夹心型免疫分析法。96孔微孔板涂有针对C肽的单克隆抗体。标准品、对照品和样本与测定缓冲液一起加入微孔板孔中。然后，微孔板在室温下以700-900转每分钟的速度在微孔板振荡器上孵育。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液清洗孔并吸干。然后加入结合物，微孔板再次在设定为700-900转每分钟的微孔板振荡器上孵育，洗涤并吸干。加入TMB底物，微孔板在室温下第三次在设定为700-900转每分钟的微孔板振荡器上孵育。第三次孵育完成后，加入停止溶液，并通过分光光度计在450 nm处测量光密度（OD）。产生的色度强度与样本中C肽的含量成正比。

供应的材料：

Component Quantity Preparation

C-peptide Microplate (96 wells) 12x8 strips Ready to use

Zero Standard (0 pM) 5 mL Ready to use

"Standards  (A-E)

(20,100,300,1000,3000 pM)*" 1 vial each Lyophilized*

Diabetes Control Levels 1 and 2* 1 vial each Lyophilized*

Assay Buffer 6 mL Ready to use

Conjugate Stock 1.2 mL 11X

Conjugate Buffer 12 mL Ready to use

Wash Buffer Concentrate 40 mL 21X

TMB Substrate 12 mL Ready to use

Stop Solution 12 mL Ready to use

Plate Sealers 3 Ready to use

*请参阅每个试剂盒随附的分析证书，了解批次特定的标准浓度、控制范围和复溶量。

c-肽ELISA测定程序：

使用前应将所有试剂和微孔板条平衡至室温（18-25°C）。使用前轻轻混合所有试剂。每次测定运行和每次使用多个微孔板时，都必须进行标准曲线测定。所有标准品、对照品和样本都应双重测定。

1. 在打开铝箔袋之前，应将微孔板平衡至室温。为标准品、对照品和样本的双重测定准备足够的微孔板条。剩余的微孔板条应存放在含有干燥剂的紧闭铝箔袋中，储存在2-8°C。

2. 分别向各自孔中移液25 µL的标准品、对照品和样本。参见试剂准备。

3. 向每个孔中移液50 µL的测定缓冲液。

4. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下振荡孵育1小时，振荡速度为700-900 rpm。

5. 倒掉孔中的内容物，并使用微孔板洗涤器每次用350 µL的工作强度洗涤缓冲液洗涤微孔板6次（参见试剂准备）。或者，使用配备洗涤喷嘴的洗涤瓶将工作强度洗涤缓冲液注入孔中。（不建议使用多通道移液器。必须用足够且相等的力量分配洗涤缓冲液，以便正确洗涤孔。）在洗涤之间，将微孔板倒置以丢弃液体，并在吸水纸上用力拍打倒置的微孔板。在最后一次洗涤后（自动或手动），通过倒置并在吸水纸上用力拍打微孔板，从孔中去除任何残留的洗涤缓冲液和气泡。

6. 向每个孔中移液100 µL的工作强度结合物（参见试剂准备）。

7. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下振荡孵育1小时，振荡速度为700-900 rpm。

8. 倒掉孔中的内容物，并使用350 µL的工作强度洗涤缓冲液洗涤微孔板6次（参见步骤5）。

9. 向每个孔中移液100 µL的TMB底物。

10. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下振荡孵育15分钟，振荡速度为700-900 rpm。

11. 向每个孔中移液100 µL的停止溶液，并轻轻摇晃微孔板以混合内容物。在进行下一步之前去除任何气泡。

12. 将微孔板放入能够读取450nm吸光度的微孔板读取器中。在加入停止溶液后应立即分析微孔板，且不得超过30分钟。

典型标准曲线：

以下结果仅用于演示目的，不能代替通过测定获得的数据。

c-肽ELISA文献参考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.