AAT Bioquest-Hydroethidine二氢乙锭促销中

氢乙啶作为测量活性氧物种的探针有效地工作。染料自由进入细胞并脱氢为乙锭化合物。该探针已被广泛用于NK细胞，并作为鉴定肿瘤中增殖和缺氧细胞的重要染料。已经使用中性粒细胞和内皮细胞以及HL60细胞和巨噬细胞进行了研究。这种探针的一个主要优点是它能够区分超氧化物和过氧化氢。荧光发射发生在600nm左右。

氢乙锭[二氢乙锭]的化学结构

艾美捷AAT Bioquest-Hydroethidine二氢乙锭：

货号 15200

单位尺寸 25 毫克

分子量 315.41

溶剂 DMSO

激发（纳米） 500

发射（纳米） 582

预期用途 仅用于研究（RUO）

风险短语 R20, R21, R22

储存 冷冻（< -15°C）；尽量减少光照暴露

荧光微孔板读取器

激发 520 纳米

发射 600 纳米

截止 550 纳米

推荐板 实心黑色

库存溶液的准备：

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

羟乙基啶[二氢乙基啶]库存溶液：

配制5-10 mM的DMSO库存溶液。注意：未使用的DMSO库存溶液应分装到单次使用的小瓶中，并储存在-20°C。避光保存。

工作溶液的准备：

羟乙基啶[二氢乙基啶]染料工作溶液：

在生理缓冲液（如PBS、HBSS、HEPES）中配制5-20 µM的染料工作浓度。注意：您的应用的最佳工作浓度必须通过实验确定。

样品实验方案：

将等体积（例如100 µL的细胞在生长介质中）的染料工作溶液加入到细胞中，然后在室温或37°C下孵化细胞5至60分钟。

在将细胞暴露于实验诱导因素之前，确定加载细胞的样本的基线荧光强度。

阴性对照应按以下方式评估：

检查染料和缓冲液/介质的无细胞混合物的荧光，无论是否含有诱导剂。在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随时间荧光的逐渐增加可能与自发水解、大气氧化和/或光诱导氧化有关。

检查未经处理（对照）的加载细胞的荧光，这些细胞一直在生长介质或缓冲液中维持。在健康细胞中，氧自由基被细胞酶和/或天然抗氧化剂清除。在染料加载恢复期之后，健康细胞应表现出在实验期间相对稳定的低水平荧光；然而，可能观察到荧光的逐渐增加（由于自氧化）或减少（由于细胞中染料的丢失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康、未经处理的细胞中荧光的突发可能表明细胞死亡的进展或其他氧化事件。

阳性对照可以用 TBHP 刺激至约100 µM的最终浓度（根据细胞的敏感性和反应增减剂量）。

文献参考：

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The confounding effects of light, sonication, and Mn(III)TBAP on quantitation of superoxide using hydroethidine

Authors: Zielonka J, Vasquez-Vivar J, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2006): 1050

Pulse radiolysis and steady-state analyses of the reaction between hydroethidine and superoxide and other oxidants

Authors: Zielonka J, Sarna T, Roberts JE, Wishart JF, Kalyanaraman B.

Journal: Arch Biochem Biophys. (2006)

Generation of superoxide anion by equine spermatozoa as detected by dihydroethidium

Authors: Burnaugh L, Sabeur K, Ball BA.

Journal: Theriogenology. (2006)

Analysis of dihydroethidium-derived oxidation products by HPLC in the assessment of superoxide production and NADPH oxidase activity in vascular systems

Authors: Fern, undefined and es DC, Wosniak J, Pescatore LA, Bertoline MA, Liberman M, Laurindo F, Santos CX.

Journal: Am J Physiol Cell Physiol. (2006)

Mechanistic similarities between oxidation of hydroethidine by Fremy's salt and superoxide: stopped-flow optical and EPR studies

Authors: Zielonka J, Zhao H, Xu Y, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2005): 853

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