ProFoldin-旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒，错过再等一年！

旋转柱膜蛋白折叠试剂盒是专为使用旋转柱从包涵体折叠膜蛋白而设计的。旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒（MFC01 - 20）包含20个蛋白质折叠旋转柱，代表20种不同的条件，含有各种去污剂和脂质，可形成胶束或双层胶束。这种胶束或双层胶束环境有助于折叠受体、离子通道和其他膜蛋白。筛选试剂盒中的折叠蛋白样品用于SDS - PAGE和活性测试。根据测试结果，选择最佳条件（即柱编号）用于制备性折叠。对于膜蛋白的规模化折叠，请使用大规模制备性膜蛋白折叠柱套装（MFC01至MFC20）。

每个旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒包含160微升试剂A、160微升试剂B、1.1毫升试剂C以及20个预装填的旋转柱，用于20种不同的蛋白质折叠条件。

每个小规模制备性膜蛋白折叠柱套装#1至#20包含用于柱#1至10的160微升试剂A或用于柱#11至20的试剂B、1.1毫升试剂C以及10个相同的预装填旋转柱，这些旋转柱是筛选试剂盒中20种条件中选定的折叠条件。

艾美捷ProFoldin-离心柱膜蛋白折叠筛选试剂盒：

代码：MFC01-20

组成：旋转柱膜蛋白折叠筛套件 #MFC01-20

小型制备膜蛋白折叠柱组#1至#20  #MFC01S至MFC20S

蛋白质折叠操作步骤：

请参阅包涵体制备的协议。蛋白质浓度约为2 - 5毫克/毫升。

样品准备：为柱#1至10准备装载样品A，为柱#11至20准备装载样品B。要准备装载样品A，将130微升溶解的包涵体与130微升试剂A混合。要制备装载样品B，将130微升溶解的包涵体与130微升试剂B混合。

柱准备：使用台式微量离心机将柱以3200转/分钟的速度离心30秒。取下柱底部的尖端和盖子。将柱放入1.5毫升微量离心管中。将柱以1400转/分钟的速度离心2分钟，然后将每个柱转移到一个干净的标记好的1.5毫升微量离心管中。

蛋白质折叠：将25微升装载样品A加载到#1至10的每个柱上；将25微升装载样品B加载到#11至20的每个柱上。将柱以3200转/分钟的速度离心4分钟。丢弃柱，将洗脱液在4℃下孵育2小时。然后向每个洗脱液中加入50微升试剂C，并将溶液在4℃下孵育过夜。将溶液以14000转/分钟的速度离心5分钟，并收集上清液进行分析。

折叠产物分析：

SDS - PAGE ：使用SDS - PAGE检查每种折叠条件下的蛋白质溶解度。要制备SDS - PAGE样品，将每个柱中的10微升折叠产物与10微升水和7微升4倍SDS - PAGE上样缓冲液混合。

活性测试 ：使用活性测定（催化或结合活性）来检查蛋白质活性。在测定中将折叠产物稀释10到20倍。例如，如果测定反应体积为100微升，则在每次反应中加入5到10微升的折叠产物。测定缓冲液中可能包含1毫摩尔十二烷基麦芽糖苷作为去污剂。

注意 ：如果没有可用的活性测定，色谱行为可以用作蛋白质折叠状态的指标。折叠良好的膜蛋白可以在含有适当去污剂（例如，1毫摩尔十二烷基麦芽糖苷）的缓冲液中进行纯化。CD或SEC - MALS分析仅适用于纯化的蛋白质样品。

包涵体溶解 ：

估计纯化包涵体中的蛋白质含量。加入溶解缓冲液（20毫摩尔Tris - HCl，pH 8.0，8摩尔尿素，10毫摩尔DTT）的体积，使蛋白质浓度约为10毫克/毫升。通过在室温下用溶解缓冲液搅拌包涵体2到4小时来完成溶解。大部分沉淀应被溶解。

将溶解材料以30000转/分钟的速度离心45分钟。保留上清液作为溶解的包涵体。

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ProFoldin专注于蛋白质科学领域的研究与开发。ProFoldin提供一系列与蛋白研究相关的产品和服务，包括蛋白除盐、蛋白折叠、膜蛋白提取、聚合酶、高通量检测试剂和荧光染料等。其中蛋白折叠柱和试剂、膜蛋白提取试剂盒为特色产品，成为了广大科研工作者研究蛋白尤其是膜蛋白有力的科研工具。

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