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Jackson丨艾美捷代理过氧化物酶链霉亲和素现货速达,实验无忧

54 人阅读发布时间:2025-10-21 15:58

在当代生命科学研究的多种检测技术中,如酶联免疫吸附实验、蛋白质印迹法和免疫组织化学等,信号放大与检测是决定实验成败与灵敏度的关键环节。其中,链霉亲和素与辣根过氧化物酶的结合物过氧化物酶链霉亲和素(货号:016-030-084),凭借其无可比拟的高亲和力与高灵敏度,已成为这一环节中不可或缺的核心工具。

 

Jackson 总部位于美国宾夕法尼的兰卡斯特,距离费城大概有40英里。Jackson在1982年由科学家展开了包括在细胞生物学,蛋白质化学,微生物学,免疫学及产品开发实验研究。 Jackson产品仅用于研究,不用于诊断或治疗用途。作为美国各种二抗生产公司之一,Jackson在各国设有几十家代理。由于其产品效价 高、种类全、价格低廉,因而成为各大药厂、试剂盒生产厂、大型实验室采购此类试剂的优选选。其产品主要包括:各种纯化的二抗、标记的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记)等。

 

一、核心组件:链霉亲和素的卓越特性

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌的细菌蛋白。它与源于蛋清的亲和素功能相似,都能以J高的亲和力与生物素结合。然而,链霉亲和素在许多化学性质上更具优势,使其在绝大多数应用中取代了亲和素。

首先,链霉亲和素呈中性或微酸性,而亲和素呈碱性且带有糖基化修饰。这些特性使得亲和素在基于电荷相互作用的检测中(如与带负电的核酸或细胞膜结合)容易产生较高的非特异性背景。链霉亲和素则有效避免了这一问题,能显著降低实验背景,提升信噪比。其次,链霉亲和素与生物素之间的结合,被认为是自然界中最强的非共价相互作用之一,其解离常数J低,意味着结合一旦形成便J为稳定,不易在洗涤过程中解离,从而保证了检测信号的稳定性和可靠性。

因此,该产品被推荐用于所有与生物素SP标记的抗体或生物素SP标记的ChromPure蛋白配套使用。研究人员可以先将特定的一抗或蛋白进行生物素化标记,再通过本产品进行检测,构建出灵活而强大的检测体系。

 

二、信号引擎:辣根过氧化物酶的功能与应用

本产品中的报告酶是辣根过氧化物酶。HRP能够催化多种底物,产生可检测的信号。根据底物的不同,可以应用于多种检测模式:

1.比色法:在ELISA或WesternBlot中,HRP与过氧化氢和显色底物共同作用,产生不溶性的有色沉淀(如DAB产生棕色沉淀,AEC产生红色沉淀),便于直接观察或通过酶标仪进行定量分析。

2.化学发光法:在WesternBlot和高灵敏度ELISA中,HRP与化学发光底物反应可产生光信号。通过X光胶片或化学发光成像系统捕获,此方法具有J宽的动态范围和J高的灵敏度。

3.荧光法:HRP也可与酪酰胺信号放大系统联用,催化荧光标记的酪酰胺底物在目标位置局部沉积,实现信号的级联放大,J大地提升了免疫荧光等技术的检测J限。

 

文章中提到,该HRP偶联物是通过改良的Nakane和Kawaoi方法制备的,这是一种成熟可靠的偶联工艺。同时,市场上也存在针对HRP的抗体,可用于检测HRP抗原或对含HRP的试剂进行信号再放大,这为设计复杂的多层放大实验提供了可能。特别值得注意的是,在哺乳动物细胞的免疫染色中,使用抗HRP抗体而非直接使用HRP的底物进行显色,可以有效避免内源性过氧化物酶活性的干扰,从而降低背景染色。

 

三、产品使用、保存与操作要点

本品为冻干粉形态,应在2-8°C下干燥保存。使用前,需按照产品说明书加入指定体积的去离子水进行重悬。若溶液不够澄清,建议进行离心处理。重悬后的液体在2-8°C下可作为原液稳定保存约6周。

 

对于长期保存,推荐以下两种方法:

分装冻存:将重悬后的产品分装至小体积离心管中,于-70°C或更低的温度下冷冻,并严格避免反复冻融。

甘油保存:加入等体积的甘油(最终浓度为50%),于-20°C以液体形式保存。

自重新水化之日起,产品的有效期为一年。若经性能测试验证合格,此有效期可酌情延长。

一个至关重要的注意事项是:本品未添加任何防腐剂。说明书明确警告,严禁使用叠氮钠作为防腐剂,因为它会强烈抑制辣根过氧化物酶的活性,导致产品失效。产品的缓冲体系为pH7.6的0.01M磷酸钠和0.25MNaCl,并含有15mg/ml的无IgG、无蛋白酶牛血清白蛋白作为稳定剂,以确保酶在储存期间的稳定性。

 

四、工作浓度建议与优化原则

产品为不同应用场景提供了建议的起始稀释范围:

ELISA:1-2ug/ml

蛋白质印迹:0.01-0.1ug/ml

组织/细胞化学:1-2ug/ml

必须强调的是,这些范围仅为实验优化的起点。最佳工作浓度会受到多种因素影响,包括生物素标记物的密度、组织样本的通透性、检测系统的总体灵敏度等。因此,研究人员在实际应用中,必须通过预实验,在建议浓度范围内及其周边进行梯度测试,以确定最适合自身实验体系的最佳稀释度。378篇文献中被引用

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