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9 人阅读发布时间:2026-04-14 15:26
一、产品概述
由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出抗PBRM1(BAF180)多克隆抗体(货号:A301-591A)为兔源抗人/小鼠PBRM1(polybromo 1,又称BAF180)蛋白C端区域(第1639–1689位氨基酸之间)的特异性多克隆抗体。PBRM1是哺乳动物SWI/SNF染色质重塑复合物中PBAF亚型的核心亚基,含有六个溴结构域(bromodomains),能够识别组蛋白乙酰化信号,在转录调控、DNA损伤应答及细胞周期检查点控制中发挥关键作用。该蛋白已被证实是一种肿瘤抑制因子,其突变在肾癌等多种肿瘤中高频出现。本抗体经抗原亲和纯化,适用于流式细胞术(Flow Cyt)、免疫组化(IHC)、免疫沉淀(IP)及免疫印迹(WB)等多种应用,是研究染色质重塑与肿瘤发生机制的有力工具。
二、详细规格
参数 | 规格
靶标 | PBRM1(polybromo 1)
反应种属 | 小鼠、人
应用 | Flow Cyt, IHC, IP, WB
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
形式 | 全IgG
免疫原 | 人PBRM1第1639位至C端之间的区域(具体表位位于1639-1689位氨基酸)
抗体类型 | IgG
偶联物 | 未偶联
纯度 | 抗原亲和纯化
抗原种属 | 人
浓度 | 1000 ug/ml(1 mg/ml)
储存温度 | 2 - 8 °C
有效期 | 自收货之日起1年
缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液,pH 7-8,含0.09% 叠氮钠
三、产品制备
本抗体采用固相载体固定的PBRM1特异性表位进行亲和纯化。免疫原对应人PBRM1(GenBank登录号AAP34197.1,GeneID 55193)第1639至1689位氨基酸之间的区域,该区域靠近蛋白C端,序列在哺乳动物中高度保守。抗体经亲和层析后,免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定(1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4)。
四、推荐应用与实验条件
所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液,一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件:
应用 | 推荐用量/稀释度 | 备注
Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 检测细胞裂解液时,二抗推荐山羊抗兔IgG(H+L)(货号A120-101P);检测免疫沉淀物时,二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体,并在封闭液中加入5%正常猪血清(货号S100-020)以消除重链干扰。
Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ug抗体(即1 mg裂解物加6 ul原液)。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。
Immunohistochemistry (IHC) | 1:1000 – 1:5000 | 对福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织切片,推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。建议同时进行不含一抗的阴性对照。
Flow Cytometry (Flow Cyt) | 1 ul / 1×10⁶ 细胞 | 细胞先用4%甲醛固定,再用90%甲醇透化。每1×10⁶细胞加入1 ul抗体(即1:1000稀释,假设反应体积100 ul)。建议使用荧光标记二抗(如FITC或Alexa Fluor 488)。
五、背景信息
PBRM1是SWI/SNF-B(PBAF)复合物的专属亚基(区别于含BRD7的BAF复合物)。该复合物利用ATP水解产生的能量滑动或驱逐核小体,促进转录因子与DNA结合,调控基因表达。PBRM1的已知功能包括:
1. 转录共激活/抑制:参与干扰素应答、核激素受体信号通路等。
2. DNA损伤应答:在DNA损伤后,PBRM1促进p21(CDKN1A)的转录,诱导细胞周期停滞,防止损伤基因组复制。
3. 肿瘤抑制:PBRM1基因在透明细胞肾细胞癌(ccRCC) 中的突变频率仅次于VHL,约30-40%的ccRCC存在PBRM1失活突变。此外,在胆管癌、乳腺癌等中也发现其突变或表达下调。
六、储存与稳定性
储存条件:2 - 8°C,严禁冷冻。冷冻会导致蛋白聚集和活性丧失。
有效期:自收货之日起1年,在2-8°C未稀释条件下保存。
运输条件:冰袋冷藏运输,收货后请立即存放于2-8°C。
防腐剂:缓冲液含0.09%叠氮钠,可抑制细菌生长。如需进行活细胞实验或无叠氮操作,请通过透析或脱盐柱去除叠氮钠。
七、典型实验结果预期
Western Blot:在HEK293全细胞裂解液中,1:5000稀释抗体可检测到一条约180–200 kDa的条带;在PBRM1敲除细胞中该条带消失。
Immunoprecipitation:使用6 ug抗体/mg裂解物可从HeLa细胞核提取物中捕获PBRM1及其结合蛋白(如BRG1、ARID2等PBAF组分)。
IHC:人肾透明细胞癌组织中PBRM1染色缺失(阴性),而癌旁正常肾小管上皮细胞核强阳性。
Flow Cytometry:固定透化后的Jurkat细胞经1 ul/106细胞染色,流式直方图显示明显的荧光峰右移。
仅限科研使用:不得用于临床诊断、治疗或人体实验。
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