兔抗RAP1抗体亲和纯化，现货促销，囤货正当时

RAP1（Repressor/Activator Protein 1，也称TERF2IP）是端粒保护蛋白复合物“shelterin”的核心组分之一，在端粒长度调控、重组抑制以及转录调节中发挥关键作用。针对RAP1的特异性抗体是研究端粒生物学、基因组稳定性及细胞衰老的重要工具。本文详细介绍由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗RAP1全长蛋白亲和纯化多克隆抗体（货号：A300-306A）的技术参数、应用条件及实验要点，为用户提供系统的操作参考。

一、产品基本规格

该抗体为兔多克隆抗体，靶向人RAP1蛋白（由TERF2IP基因编码，GeneID 54386）。反应性经测试为人源样本。抗体形式为完整IgG，未偶联标记物，亚型为IgG。采用重组全长人RAP1蛋白作为免疫原，经抗原亲和纯化获得。抗体浓度为1000 µg/ml（1 mg/ml），保存于Tris-柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液（pH 7–8）中，含0.09%叠氮钠作为防腐剂。储存条件为2–8°C，自收货之日起有效期为一年。

注意事项：缓冲液中含叠氮钠，会抑制过氧化物酶活性。若后续检测涉及HRP标记二抗，建议将一抗稀释至工作浓度后使用（叠氮钠浓度被大幅稀释，影响可忽略）；对于极高灵敏度的化学发光检测，可通过透析或超滤去除叠氮钠。叠氮钠也具有毒性，操作时需戴手套。

二、免疫原与生产工艺

抗体采用重组全长人RAP1蛋白（参考序列NP_061848.2）免疫兔子。该蛋白包含端粒结合因子TRF2相互作用区域以及Myb样结构域。免疫后获得的抗血清通过固相载体固定的RAP1蛋白进行亲和层析纯化，特异性捕获识别天然或变性RAP1的IgG抗体。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。该工艺确保了抗体高特异性与低背景。

三、推荐的实验应用与稀释条件

以下应用及稀释度均经过验证或提供明确的起始范围。所有Western blot实验均使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育过夜（4°C或室温均可，推荐4°C以提高信噪比）。

1. 蛋白质印迹（Western Blot）

推荐稀释度：1:2,000 – 1:10,000

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（推荐货号A120-101P）

免疫沉淀物WB：需使用抗兔IgG轻链HRP标记二抗，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）。这一策略可避免检测时出现变性IgG重链（约55 kDa）的干扰条带，尤其适用于分析RAP1（分子量约65–70 kDa）与其它蛋白的共沉淀。

2. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:500 – 1:2,000

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复。可采用微波或高压修复方式，95–100°C维持15–20分钟。相比于柠檬酸缓冲液（pH 6.0），碱性Tris-EDTA对核抗原RAP1的暴露效果更佳。

封闭：建议使用5%正常山羊血清或3% BSA封闭非特异性位点。

3. 免疫沉淀（IP）

推荐用量：每毫克细胞裂解液使用6 µg抗体。裂解液蛋白浓度建议调整至1–5 mg/ml，加入抗体后4°C旋转孵育2小时或过夜。使用蛋白A或蛋白G琼脂糖珠捕获免疫复合物。洗涤步骤至少3–5次，使用IP裂解缓冲液（如含150 mM NaCl、0.5% NP-40的Tris缓冲液）。

四、靶点生物学背景

RAP1（也称TRF2相互作用蛋白1、DRIP5）是端粒shelterin复合物的组成蛋白之一。Shelterin复合物包括TRF1、TRF2、POT1、TPP1、TIN2和RAP1，共同保护端粒免受DNA损伤修复机制的误认。与其他组分不同，RAP1对端粒“封帽”（capping）和非同源末端连接（NHEJ）的抑制并非必需；其核心功能是负向调控端粒重组，并抑制同源定向修复（HDR）。缺乏RAP1会导致端粒出现超长或重组异常，进而影响基因组稳定性。

此外，RAP1还作为转录调节因子，可在端粒外定位至基因启动子区，参与代谢、炎症及氧化应激相关基因的表达调控。因此，该抗体不仅适用于端粒生物学研究，也适用于信号转导、衰老及肿瘤发生机制探索。

五、产品性能特点

1.全长蛋白免疫原：相比于多肽免疫，全长重组蛋白可产生识别多个表位的多克隆抗体，提高对天然构象和翻译后修饰的识别能力。

2.亲和纯化：非特异性反应低，WB中背景清晰。预期在HeLa、293T等细胞裂解液中检测到约65–70 kDa的主条带（RAP1分子量约68 kDa）。

3.宽应用范围：WB、IHC和IP三种应用均提供验证稀释度，尤其IP用量明确（6 µg/mg裂解液），便于标准化操作。

4.高稀释比：WB稀释度最高达1:10,000，IHC达1:2,000，抗体经济性良好。

5.稳定性：2–8°C保存一年，无需冷冻分装，避免反复冻融导致的活性损失。

六、储存与稳定性

抗体原液于2–8°C避光保存，切勿冷冻。冷冻会导致蛋白聚集和效价下降。在推荐的缓冲液（含叠氮钠防腐）中，抗体至少稳定一年。若需长期储存（超过一年），可无菌分装后冷冻于-20°C或-80°C，但应避免反复冻融（建议分装成单次用量）。注意叠氮钠在冷冻条件下仍可抑菌。