小鼠IgG ELISA试剂盒现货促销，有大包装可选更实惠

产品概述

本产品为艾美捷Bethyl Laboratories推出用于定量检测小鼠血清及血浆中免疫球蛋白G（IgG）浓度的夹心法ELISA试剂盒（货号：E99-131）。试剂盒采用预包被96孔板、生物素化检测抗体及链霉亲和素-HRP（SA-HRP）显色系统，检测范围为0.69 – 500 ng/ml，适用于小鼠IgG的精确定量分析。该试剂盒在小鼠免疫学、抗体药代动力学、疫苗效价评估及自身免疫疾病模型研究中具有广泛应用价值。

核心参数

参数 详细信息

靶标 小鼠IgG（Mouse IgG）

反应种属 小鼠

应用 ELISA

检测范围 0.69 – 500 ng/ml

样本类型 血清、血浆

检测方法 生物素化-链霉亲和素-HRP

检测类型 夹心法ELISA

保存条件 2 - 8 °C

有效期 收货后6个月

试剂盒组分

组分 规格 数量

小鼠IgG预包被96孔板 96孔/板 1块

小鼠IgG标准品 500 ng/瓶 2瓶

小鼠IgG检测抗体 12 ml 1瓶

10X 稀释缓冲液B 25 ml 1瓶

HRP溶液A 12 ml 1瓶

TMB底物液 12 ml 1瓶

终止液 12 ml 1瓶

20X 洗涤缓冲液 50 ml 1瓶

封板膜 — 6张

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）：

1. 包被：96孔板已预包被抗小鼠IgG捕获抗体。

2. 加样：将标准品或待测样本加入孔中，样本中的小鼠IgG与捕获抗体结合。

3. 检测：加入生物素化的小鼠IgG检测抗体，形成“捕获抗体-IgG-检测抗体”夹心复合物。

4. 酶联：加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶（HRP Solution A），与检测抗体上的生物素特异性结合。

5. 显色：加入TMB底物液，HRP催化底物产生蓝色产物；加入终止液后颜色变为黄色。

6. 读数：在450 nm波长处测定吸光度（OD值）。样本中的IgG浓度与OD值呈正比，通过标准曲线计算得出。

操作流程要点

样本准备

血清/血浆：按常规方法采集，避免溶血和反复冻融。建议适当稀释后检测（具体稀释倍数需预实验确定，一般血清样本中IgG含量较高，需稀释数万倍）。

使用10X稀释缓冲液B配制1X工作液，用于标准品和样本的稀释。稀释缓冲液B含有蛋白稳定剂和防腐剂，可有效维持抗体在稀释状态下的稳定性。

洗涤液配制

将50 ml 20X洗涤缓冲液用去离子水或蒸馏水稀释至1000 ml（即1:20稀释），混匀备用。洗涤液中含有表面活性剂，可有效降低非特异性吸附。

标准曲线制备

标准品每瓶含500 ng小鼠IgG。加入适量1X稀释缓冲液复溶，制备最高浓度标准品（500 ng/ml）。

进行倍比稀释，建议制备至少7-8个标准点（如500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.90625、1.953125、0.9765625、0.69 ng/ml）。设置零孔（稀释缓冲液空白）作为背景对照。

检测步骤（简述）

1. 将标准品和稀释后的样本加入预包被板孔中，每孔100 µl，覆盖封板膜，在室温或37°C孵育1-2小时（具体时间和温度请参考试剂盒内说明书）。

2. 弃去孔内液体，每孔加入300 µl 1X洗涤液，洗板3-5次。每次洗涤后应充分拍干孔内残留液体。

3. 加入检测抗体（已稀释至工作浓度），每孔100 µl，孵育30-60分钟。

4. 洗板3-5次。

5. 加入HRP溶液A（已稀释），每孔100 µl，孵育30分钟。

6. 洗板3-5次。

7. 加入TMB底物液，每孔100 µl，避光孵育10-20分钟，直至最高浓度标准品孔显色达到深蓝色、背景空对照孔无明显蓝色。

8. 加入终止液，每孔100 µl，轻拍混匀，蓝色立即转变为黄色。

9. 在30分钟内，于450 nm波长处读取OD值。若使用酶标仪的双波长模式（450 nm减去570 nm或630 nm背景波长），可减少板底瑕疵干扰。

结果计算

以标准品浓度的对数值为横坐标，对应的OD值（或经四参数拟合后的值）为纵坐标，绘制标准曲线。

将待测样本的OD值代入标准曲线方程，计算出样本中IgG的浓度，再乘以稀释倍数即得原始样本浓度。

使用注意事项

1. 样本稀释：正常小鼠血清中IgG浓度约为2-10 mg/ml，远超试剂盒检测上限（500 ng/ml）。建议先进行预实验确定最佳稀释倍数（通常需稀释1:10,000至1:50,000倍）。血浆样本同样需高倍稀释。建议使用试剂盒提供的稀释缓冲液进行梯度稀释。

2. 避免交叉污染：使用一次性吸头，标准品和样本按顺序加样。洗板时确保每次洗涤液加满孔（300 µl）并充分吸干，不可出现干孔现象，否则会导致背景增高或孔间差异。

3. 显色控制：TMB显色时间需根据室温及酶活性适当调整。室温较低时显色较慢，可适当延长至20-30分钟；室温较高时显色迅速，需控制时间，避免最高浓度标准品孔出现“钩状效应”或颜色过深导致酶标仪读数溢出。

4. 检测波长：终止后的反应产物在450 nm处读取OD值。若使用双波长校正（450 nm减去570 nm或630 nm），可减少因板底瑕疵引起的误差。

5. 有效期：试剂盒自收货之日起2-8°C保存，有效期6个月。不同批次试剂组分不可混用，以确保批间一致性。

6. 标准品使用：标准品复溶后建议按单次使用量分装保存于-20°C或-80°C，避免反复冻融导致蛋白降解。冻融次数不超过2次。

7. 防腐剂兼容性：部分样本（如含叠d化钠的保存血浆）可能影响HRP活性，需在实验前通过透析或稀释降低叠氮化物干扰。