Cy3单琥珀酰亚胺酯荧光染料（与Cy3® NHS酯化学等效）盛夏冰点价正在促销中

一、产品概述与核心特性

Cy3 NHS 酯（Cyanine 3 monosuccinimidyl ester）是一种胺反应性橙色荧光染料，在生物医学研究领域中广泛应用于蛋白质、抗体及寡核苷酸的荧光标记，Cyanine 3 monosuccinimidyl ester [equivalent to Cy3® NHS ester]由艾美捷代理推出AAT Bioquest推出，货号：AAT-141。该染料与 GE Healthcare 的 Cy3® NHS Ester 在化学性质上完全等效，二者可互换使用。

核心特性参数：

-分子量：829.03 Da

-物理形态：红色粉末

-溶解性：可使用 DMSO 复溶

-反应基团：NHS 酯（琥珀酰亚胺酯）

-反应靶点：伯胺基团（如赖氨酸残基、胺修饰寡核苷酸）

-最佳反应 pH：8.5 ± 0.5

二、光谱特性与检测兼容性

Cy3 属于菁染料家族，呈现黄色荧光。其关键光谱参数如下：

参数 | 数值

激发峰 | 555 nm

发射峰 | 569 nm

推荐激发光源 | 532 nm 或 555 nm 激光

兼容滤光片组 | Cy3 或 TRITC 通道

pH 耐受范围 | pH 4–10

该染料的荧光信号在较宽的 pH 范围内保持稳定，这一特性使其适用于多种实验条件下的检测需求。当采用 532 nm 激光激发时，Cy3 可提供明亮且光稳定性良好的信号，特别适合荧光显微镜成像和流式细胞术分析。

三、标记反应操作要点

3.1 反应条件优化

NHS 酯官能团与伯胺基团的偶联反应依赖于亲核攻击机制。在 pH 8.5 ± 0.5 的缓冲体系中，赖氨酸残基的 ε-氨基保持去质子化状态，反应活性最高。建议反应在室温条件下进行 1–4 小时，或 4°C 孵育过夜。

3.2 标记效率控制

标记完成后，需计算标记度（Degree of Labeling, DOL），即每个蛋白质分子上结合的染料分子数。过度标记（DOL 过高）会导致相邻 Cy3 分子之间发生自淬灭，使荧光信号显著下降，而非增强。建议将 DOL 控制在 2–6 范围内，具体数值需根据实验需求优化确定。

四、典型应用场景

4.1 免疫荧光（IF/ICC）

Cy3 标记的二抗是免疫荧光实验中的常用工具。例如：使用小鼠抗微管蛋白一抗孵育细胞后，以 Cy3 标记的山羊抗小鼠 IgG 作为二抗，可清晰显示细胞骨架结构。

4.2 荧光原位杂交（FISH）

Cy3 标记的寡核苷酸探针可用于 FISH 实验，实现细胞内遗传物质的空间定位。将 Cy3 与淬灭基团配对后，还可构建 TaqMan 探针或分子信标，用于实时荧光定量 PCR 检测。

4.3 多色成像

Cy3 与 FITC（约 520 nm 发射）和 Cy5（约 670 nm 发射）的光谱重叠度低，适用于三重标记实验，可同时检测多个靶标分子。

五、不同形式的选择指南

除 NHS 酯形式外，Cy3 还提供以下几种衍生物供选择：

产品形式 | 反应靶点 | 适用场景

Cy3 马来酰亚胺 | 巯基（半胱氨酸残基） | 标记含游离巯基的蛋白质或抗体

Cy3 亚磷酰胺 | 5'-羟基 | 寡核苷酸化学合成中掺入

Cy3 NHS 酯 | 伯胺基 | 常规蛋白质/抗体标记

六、相关染料比较与替代选择

Cy3 vs Sulfo-Cy3： 两者化学等效，但 Sulfo-Cy3 带有磺酸基团（SO₃⁻），水溶性更高，不易在水溶液中形成聚集体，因此在实际应用中更为常见。

Cy3 vs Cy3B： Cy3B 是 Cy3 的类似物，抗内部去激发能力更强，可测得更高的荧光信号强度，光稳定性也有提升。

Cy3 vs iFluor® 555： iFluor® 555 在光谱特性上与 Cy3 高度相似，但具有更优异的水溶性和亮度，光漂白速率更低，且成本相对经济，可作为 Cy3 的替代选项纳入实验设计考量。

七、实验注意事项

1. 复溶后的 Cy3 NHS 酯应分装保存于 -20°C，避免反复冻融

2. 反应体系应避免含伯胺基团的缓冲剂（如 Tris、甘氨酸），推荐使用碳酸氢盐缓冲液或 HEPES

3. 未反应的染料可通过脱盐柱或透析去除

4. 标记产物应避光保存，以减缓荧光淬灭

综上，Cy3 NHS 酯凭借其稳定的光谱特性、便捷的标记化学和广泛的应用兼容性，是荧光标记实验中值得优先考虑的试剂之一。根据具体实验需求选择合适的形式和替代染料，可进一步优化实验效果与成本效益。