说明书丨Worthington蛋白酶 K特性及参考文献

天然蛋白酶 K，产品代码 PROK 和 PROKS 已停产并被重组蛋白酶 K，产品代码 PROKR 和 PROKRS 取代。重组产品符合与天然产品相同的规格。

蛋白酶 K 是一种丝氨酸蛋白酶，对脂肪族、芳香族和其他疏水性氨基酸具有广泛的特异性。PROK 的分子量为 27,000 道尔顿，并且是 Ca 2+依赖性的。它不会被 EDTA、巯基试剂、PCMB、TLCK 或 TPCK 等金属离子螯合剂灭活。它还在 0.5% SDS 中保持活性。它可以被 PMSF 或 DFP 抑制。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K化学性质：

稳定性/储存： 冻干粉在 2-8°C 下可稳定一年。含 1mM CaCl 2的 50mM Tris-HCl，pH 8.0 溶液在 2-8°C 下可稳定数月。储存在 2-8°C。

单位定义：一个单位在 37°C、pH 7.5 下，使用尿素变性血红蛋白作为底物，释放 1 微摩尔 Folin 阳性氨基酸，以酪氨酸计。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K测定：

蛋白酶 K 测定：

Method : 蛋白酶 K 水解用尿素变性的血红蛋白，并释放 Folin Postive 氨基酸和肽，这些氨基酸和肽被确定为酪氨酸等价物。1 个单位在 37°C、pH 7.5 下以变性血红蛋白为底物释放 1 μ 摩尔 Folin 阳性氨基酸。

试剂：

0.05 N HCl - 稀释 0.82 ml 浓 用试剂级水将 HCl 稀释至 200 ml。

0.5 M NaOH - 将 4.0 gm NaOH 溶解在 200 ml 试剂级水中。

缓冲底物 - 将 2.0 gm 血红蛋白溶解在 35 ml 试剂级水中，加入 36.0 gm 尿素和 16 ml 0.5 M NaOH。在室温下搅拌 30 - 60 分钟。加入 0.618 克硼丨酸并搅拌。用 5 N HCl 将 pH 值调至 7.5，并用 qs 调至 100 ml。

酪氨酸标准品 (2.5 nmol/L) - 将 45.3 mg 酪氨酸溶解在 100 ml 0.05 N HCl 中。

0.3 M 三氯丨乙酸 - 将 9.8 g 三氯丨乙酸溶解在 200 ml 试剂级水中。

Folin 试剂 - 将 10 ml Folin-Ciocalteus Phenol Reagent 添加到 20 ml 试剂级水中。

酶：

将 10 mg 冻干材料溶解在 1 ml 试剂级水中。使用前立即用水准备 1:1000 稀释液。

程序：

为空白、标准和测试标记透明玻璃试管。加入 2.5 ml 缓冲底物并在 37°C 下孵育 5 分钟。向标准管中加入 0.2 ml 酪氨酸标准品，在测试中加入 0.2 ml 样品，在空白中加入 0.2 ml 0.05 N HCl，开始反应。在 37°C 下孵育 10 分钟。加入 5.0 ml 三氯乙丨酸终止反应。混合，然后向空白和标准中加入 0.2 ml 样品，并在测试中加入 0.2 ml 0.05 N HCl。混合并在室温下静置 10 分钟，过滤并用移液管将 1.0 ml 滤液、2.0 ml 0.5 N NaOH 和 0.6 ml Folin 试剂移入试管中。搅拌均匀。静置 15 分钟并读取 A 578 nm。

艾美捷Worthington 蛋白酶 K相关文献：

1.Bernabeu, C.、Conde, P.、Vasquez, D. 和 Ballesta, J.： 细菌核糖体的肽基转移酶：对蛋白酶 K 的抗性， Eur J Biochem 93、527、1979

2.Betzel, C.、Pal, G.、Struck, M.、Jany, K. 和 Saenger, W.： 蛋白酶 K 的活性位点几何：其与二肽氯甲丨基丨酮抑制剂的复合物的晶体学研究 ， FEBS Lett。197 , 105, 1986

3.Brdicka, D. 和 Krebs, W.： 通过蛋白酶定位酶 ， Biochim Biophys Acta 297、203、1972

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml