说明书丨Worthington逆转录酶、重组 HIV 检测方案

色谱纯化的异二聚体，由 66kDa 和 51kDa 亚基组成。以 10mM 磷酸钾、pH 7.4、1mM DTT 和 20% 甘油溶液的形式提供。主要用于艾滋病研究目的；该酶在其他应用中的保真度低于 AMV 酶，例如从 mRNA 制备 cDNA 用于克隆目的。

艾美捷Worthington 逆转录酶、重组 HIV化学性质：

单位定义：一个单位在 37°C、pH 8.3 条件下，使用 poly(A)/oligo(dT)12-18 作为模板/引物在 20 分钟内将 1 nmole 氚化 d-TMP 加入酸可沉淀产品中。

注意：目前的检测使用更有效的模板/引物组合，与我们之前的检测相比，比活性增加了大约两倍。因此，Worthington 的包装尺寸包含相同数量的蛋白质，其活性是新测定的两倍。

艾美捷Worthington 逆转录酶、重组 HIV测定：

单元定义：一个单元将 1 纳摩尔氚化 dTMP 加入酸不溶性产物中，使用 poly(A)•oligo(dT) 12-18作为模板引物，在 37°C 下 20 分钟。

试剂：

0.05 M Tris，pH 8.3，含有 0.008 M MgCl 2

1 mg/ml 多聚腺苷酸水溶液（聚 A）

DNA引物：寡核苷酸d(T) 12-18

1 μ 摩尔 dTTP/mL 储备溶液

[甲基- 3 H]-胸苷 5'-三磷酸 ( 3 H-dTTP)

dTTP- 3 H-dTTP 工作混合物：每毫升 100 nmol/mL dTTP 添加 1-2 μL 3 H-dTTP，以获得 1 至 1.5 x 10 5 cpm/mL

1% 牛血清白蛋白

10% 高氯酸

1% 高氯酸

缓冲底物反应混合物：新鲜制备，临用前：

每 1mL 反应混合物所需混合物：

0.7 mL Tris/HCl，pH 8.3，0.008M MgCl 2

0.3 mL 1 mg/mL poly(A) RNA 模板

0.005 mL 0.02 mg /mL oligo d(T) 12-18 DNA 引物

0.02mL 1% BSA

酶：

根据需要用 0.05M Tris/HCl，pH 8.3，0.008M MgCl 2稀释，含有 0.1 mg/mL (1%) BSA

程序：

如下移液器到每个管中：

缓冲底物混合物 0.1 毫升

dTTP- 3 H 3 -dTTP 0.1 毫升

酶 5-10 微升

在 37°C 下孵育 20 分钟。加入 1 ml 10% 冷高氯酸终止反应。通过与 Millipore 真空歧管一起使用的 0.2μ 歧管过滤器进行过滤。使用 2mL 1% 冷高氯酸/洗涤液洗涤四次。将过滤器转移到闪烁瓶中。加入 2mL Cellosolve溶解过滤器。添加 Cellosolve 后过滤器变得不透明。确保过滤器在继续之前溶解。加入 10mL 闪烁鸡尾酒并计数。

艾美捷Worthington 逆转录酶、重组 HIV相关文献：

1.Abbotts, J., and Wilson, S.: Inhibitors of HIV-1 Reverse Transcriptase and Fidelity of in vitro DNA Replication , J Enzym Inhib 6, 35, 1992

2.Abbotts, J., Jaju, M., and Wilson, S.: Thermodynamics of A:G Mismatch Poly(dG) Synthesis by Human Immunodeficiency Virus 1 Reverse Transcriptase , J Biol Chem 266, 3937, 1991

3.Austermann, S., Kruhoffer, M., and Grosse, F.: Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type-1 Reverse Transcriptase by 3'-Blocked Oligonucleotide Primers , Biochem Pharmacol 43, 2581, 1992

Worthington核心酶：包括：胶原蛋白酶，脱氧核糖核酸酶I，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml