兔抗H2AX抗体亲和纯化现货促销，实验不等人！

一、产品概述  

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A300-082A），特异性靶向组蛋白H2AX的C末端区域。H2AX是组蛋白H2A家族的关键成员，在DNA损伤修复应答和基因组稳定性维持中发挥核心作用。该抗体经抗原亲和纯化，未偶联标记，适用于免疫印迹（WB）和免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF），且与人、小鼠样本有交叉反应性。以下将从基本参数、免疫原信息、应用条件、储存稳定性及生物学背景等方面进行详细说明。

二、关键规格参数

项目 | 详细内容

靶标 | H2AX

反应种属 | 小鼠、人类

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 对应人H2AX蛋白第93位至C末端之间的表位（Swiss-Prot P16104，GeneID 3014）

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化的H2AX特异性表位）

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 µg/mL

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮钠

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

生产流程 | 亲和纯化后，通过Beer定律测定IgG浓度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值为1.4）

> 注：0.09%叠氮钠作为防腐剂，使用时应考虑其对过氧化物酶标记二抗的影响，必要时可通过透析或超滤去除。

三、免疫原与特异性

本抗体的表位定位于人H2AX蛋白C末端（介于第93位氨基酸与末端之间）。通过固相载体上固定的特异性表位进行亲和纯化，确保抗体识别天然及变性的H2AX。经内部验证，该抗体可检测人源和小鼠源H2AX，不与其他组蛋白家族成员发生显著交叉反应。反应性覆盖物种依据免疫原序列同源性预测，实际实验中建议以阳性对照（如用喜树碱或电离辐射处理后的细胞裂解液）确认信号。

四、推荐应用与实验条件

以下稀释度均为起始推荐范围，用户需根据具体实验体系进行优化。

1. 免疫印迹（Western Blot, WB）

稀释度：1:2000 – 1:10000  

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（Tris缓冲盐水+0.1% Tween-20）  

孵育条件：一抗4°C孵育过夜（推荐）  

二抗推荐：山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，如货号A120-101P  

阳性对照：HeLa细胞裂解物、小鼠胚胎成纤维细胞裂解物或经DNA损伤诱导剂处理的样本（如0.5 μM喜树碱处理1小时）。

2. 免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）

稀释度：1:200 – 1:1000  

固定方法：推荐使用甲醛固定  

通透处理：甲醛固定的细胞建议使用Triton X-100进行通透  

注意事项：对于石蜡包埋的细胞切片，推荐使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复。

3. 免疫组织化学（IHC）— 仅作参考

稀释度：1:1000 – 1:5000  

抗原修复：对FFPE组织切片，必须使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复  

应用范围：虽然产品主要验证了ICC-IF和WB，但IHC条件可作为优化起点，建议并行阴性对照（兔IgG）和阳性组织（如小鼠脾脏或睾丸）。

> 注：本产品未验证用于流式细胞术、ChIP或IP，用户需自行验证。

五、产品特性与质量控制

纯化工艺：采用表位特异性亲和纯化，较蛋白A/G纯化具有更高的特异性，显著降低背景。  

浓度准确性：通过A280定量，并基于IgG的消光系数折算，确保批次间一致性。  

功能验证：每批抗体均通过WB检测经DNA损伤处理的细胞裂解液，确认H2AX条带（约15 kDa，磷酸化和非磷酸化形式均可识别，因表位位于C末端恒定区）。  

批间稳定性：生产记录完整，遵循内部QC标准，符合ISO 9001质量管理体系（母公司Fortis Life Sciences）。

六、储存与稳定性

储存温度：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、效价下降。  

运输条件：湿冰运输，收货后请立即按上述温度保存。  

分装建议：若需长期使用，建议分装后存放于2–8°C，避免污染。不可稀释后长期储存。  

有效期：自收货之日起1年。过期产品可能信号减弱，建议重新订购。

七、生物学背景：H2AX的功能与研究价值

H2AX是组蛋白H2A家族的变体，在真核生物中高度保守。其C末端含有一个保守的Ser139残基，该残基能被PI3K家族激酶（如ATM、ATR、DNA-PK）磷酸化，形成γH2AX。γH2AX是DNA双链断裂（DSB）的经典标志物，在DNA损伤修复、细胞周期检查点激活和染色体稳定性维持中起关键作用。检测总H2AX水平可用于评估组蛋白表达变化，而该抗体识别的表位不依赖于Ser139磷酸化状态，因此可检测细胞内总H2AX蛋白量，适用于分析药物或基因操作对H2AX表达水平的影响。

典型研究领域：  

DNA损伤应答与修复机制  

放射生物学与化学致突变  

肿瘤发生与基因组不稳定性  

表观遗传学与染色质重塑  

细胞衰老与凋亡

注意事项：  

因H2AX分子量较小（约15 kDa），在WB实验中建议使用高分辨率凝胶（如15% SDS-PAGE）并延长转膜时间（使用PVDF膜，0.2 μm孔径）。  

检测γH2AX时需使用磷酸化特异性抗体（如A300-081A），本产品为非磷酸化特异性，适合检测总蛋白。