兔抗Cul4a抗体亲和纯化库存有限，促销直降底价

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A300-739A），特异性靶向Cullin 4A（Cul4a）蛋白的C末端区域（第709位至C末端之间）。Cul4a是cullin家族成员之一，作为E3泛素连接酶复合物的骨架蛋白，在细胞周期调控、DNA损伤检查点应答及底物蛋白泛素化降解中发挥核心作用。该抗体经抗原亲和纯化，未偶联标记，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），且与人、小鼠样本有交叉反应性。以下将从基本参数、免疫原信息、应用条件、储存稳定性及生物学背景等方面进行详细说明。

二、关键规格参数

项目 | 详细内容

靶标| Cul4a (Cullin 4A)

反应种属| 小鼠、人类

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗体形式| 完整IgG

免疫原| 对应人Cul4a蛋白第709位至C末端（第759位）之间的表位（参考序列NP_001008895.1，GeneID 8451）

亚型| IgG

偶联物| 未偶联

纯化方式| 抗原亲和纯化（使用固定化的Cul4a特异性表位）

抗原物种| 人

浓度| 1000 µg/mL

缓冲液| Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮钠

储存条件| 2–8 °C

保质期| 收货后1年

生产流程| 亲和纯化后，通过Beer定律测定IgG浓度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值为1.4）

> 注：0.09%叠氮钠作为防腐剂，使用IP二抗时若采用HRP标记，需注意叠氮钠会抑制HRP活性。建议在IP洗脱或二抗孵育前充分去除叠氮钠。

三、免疫原与特异性

本抗体的表位定位于人Cul4a蛋白的C末端区域（介于第709位氨基酸与第759位C末端之间）。通过固相载体上固定的特异性表位进行亲和纯化，确保抗体识别天然及变性的Cul4a。经内部验证，该抗体可检测人源和小鼠源Cul4a，不与其他cullin家族成员（如Cul1、Cul2、Cul3、Cul4b等）发生显著交叉反应。反应性覆盖物种依据免疫原序列同源性预测，实际实验中建议以阳性对照（如HEK293或HeLa细胞裂解液）确认信号。

四、推荐应用与实验条件

以下稀释度均为起始推荐范围，用户需根据具体实验体系进行优化。

1. 免疫印迹（Western Blot, WB）

稀释度：1:10,000 – 1:25,000（高灵敏度，可显著节约抗体用量）  

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（Tris缓冲盐水+0.1% Tween-20）  

孵育条件：一抗4°C孵育过夜（推荐）  

二抗推荐：  

常规细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，如货号A120-101P。  

免疫沉淀后WB：为避免变性IP产物中重链（~55 kDa）信号干扰，推荐使用抗兔IgG轻链特异性HRP标记二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景。  

阳性对照：HEK293、HeLa或小鼠胚胎成纤维细胞裂解物，也可使用过表达Cul4a的细胞系。

2. 免疫组织化学（IHC）

稀释度：1:1000 – 1:5000  

抗原修复：对FFPE（福尔马林固定、石蜡包埋）组织切片，必须使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。  

推荐对照：使用兔IgG同型对照作为阴性对照，以阳性组织（如小鼠脾脏、睾丸或多种肿瘤组织）确认染色特异性。  

检测系统：适用于显色法（DAB）或荧光法IHC。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 µg抗体 / mg总蛋白裂解液

操作建议：  

裂解液推荐使用非变性裂解缓冲液（如NP-40或Triton X-100体系），避免破坏蛋白-蛋白相互作用。  

孵育条件：4°C旋转孵育2小时或过夜。  

使用Protein A/G琼脂糖或磁珠捕获免疫复合物。  

洗脱后通过WB检测，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗以避免重链干扰。  

阳性对照：过表达Cul4a的细胞裂解液或已知内源性Cul4a表达量较高的细胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本产品未验证用于ICC-IF或ChIP，用户需自行探索。

五、产品特性与质量控制

纯化工艺：采用表位特异性亲和纯化，较常规蛋白A/G纯化具有更高的特异性，显著降低非特异性背景。C末端表位的选择避免了与其它cullin家族成员的高度同源区，提升靶向性。  

浓度与效价：浓度高达1000 µg/mL，WB推荐稀释比可达1:25,000，意味着每微升抗体可制备25 mL工作液，经济性突出。  

功能验证：每批抗体均通过WB检测多种细胞裂解液中的内源性Cul4a（分子量约90 kDa），确认单一条带位置正确。  

批次间一致性：生产记录完整，遵循内部QC标准，符合ISO 9001质量管理体系（母公司Fortis Life Sciences）。  

优势总结：  

高稀释比 → 实验成本低  

多应用验证（IHC、IP、WB） → 一抗多用  

长效稳定储存（2-8°C） → 使用便捷  

六、储存与稳定性

储存温度：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、效价下降。  

运输条件：湿冰运输，收货后请立即按上述温度保存。  

分装建议：若需长期使用，建议分装成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀释后长期储存。  

有效期：自收货之日起1年。过期产品可能信号减弱，建议重新订购。  

七、生物学背景：Cul4a的功能与研究价值

Cul4a是cullin蛋白家族的成员之一，作为骨架蛋白参与组装Cullin-RING E3泛素连接酶复合物（CRL4）。该复合物包含Cul4a、Rbx1、DDB1以及多种底物识别受体（如DCAF家族蛋白）。CRL4复合物介导多种关键底物的泛素化修饰，进而通过蛋白酶体途径降解底物，调控以下重要生理过程：

细胞周期调控：CRL4复合物降解CDT1、p21、p27等细胞周期调节因子，确保DNA复制的有序进行。  

DNA损伤应答：在紫外线或复制压力下，CRL4复合物（含DDB2或CSA受体）参与核苷酸切除修复和跨损伤合成。  

染色质重塑与表观遗传：Cul4a参与组蛋白H3/H4的泛素化，影响基因转录活性。  

肿瘤发生与发展：CUL4A基因在多种癌症（如乳腺癌、肝癌、结直肠癌）中扩增或过表达，与不良预后相关，因此成为潜在的治疗靶点。