Screen Quest™ Calbryte-520 钙离子检测试剂盒（无丙磺舒，免洗涤），现货促销，抓住实验黄金期

一、背景与原理

钙流检测（Calcium flux assay）是药物发现领域中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）靶点的s选方法之一。GPCR作为最重要的药物靶点家族，其信号转导通常伴随细胞内钙离子浓度的瞬时升高。通过监测这一钙离子动员过程，研究者可以高效评估化合物对受体的激动或抑制活性。

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒免洗式钙离子检测试剂盒，货号：AAT-36317，提供了一套基于荧光均相检测的完整方案，用于灵敏、稳定地测定胞内钙离子变化。其核心原理依赖于专有的Calbryte™-520 AM荧光探针。该探针为乙酰甲氧基酯（AM）衍生物形式，具有良好的细胞膜穿透性，可自由进入活细胞。进入胞质后，胞内非特异性酯酶水解其亲脂性阻断基团，生成带负电荷的极性荧光染料，从而被滞留于细胞内。当胞内钙离子浓度升高时，游离钙与Calbryte™-520结合，导致荧光信号急剧增强——其增幅可达基线水平的100至250倍。这一极高的信噪比使得即使微弱的钙信号也能被可靠检出，特别适用于高通量筛选（HTS）中对微弱活性化合物的捕获。

二、技术优势与核心特性

相较于传统钙离子荧光探针（如Fluo-3、Fluo-4等），Calbryte™-520 AM具有多项明确的技术优势。

首先，无需丙磺舒（Probenecid-Free）是本品最突出的特点。传统钙离子染料（如Fluo-4 AM）在细胞内易被有机阴离子转运蛋白外排，导致染料滞留率低、信号衰减快，因此通常需添加丙磺舒——一种有机阴离子转运蛋白抑制剂——来维持胞内染料水平。然而丙磺舒本身对部分细胞类型（尤其某些原代细胞和敏感细胞系）存在细胞毒性或干扰靶点信号的风险。Calbryte™-520 AM凭借其优化的分子结构，展现出优异的细胞滞留性能，无需丙磺舒辅助即可维持充足的胞内浓度，从而消除了丙磺舒可能带来的数据偏倚和细胞活性干扰。

其次，免洗涤（Wash-Free）操作大幅简化了实验流程。传统方案需在染料负载后多次洗涤以去除胞外残留染料，不仅增加了操作步骤和细胞损失风险，且难以适配自动化高通量平台。本试剂盒采用优化的染料配方和缓冲体系，支持直接加样、孵育即测的全过程，无需任何洗涤步骤。这不仅减少了手动操作时间，也降低了因洗涤操作引入的孔间差异，尤其对于贴壁性较差的细胞系或悬浮细胞，免洗涤特性显著提高了实验的可操作性和数据重现性。

再者，Calbryte™-520的荧光激发/发射光谱（约为490 nm/520 nm）与标准FITC通道高度匹配，可无缝兼容市面上绝大多数荧光酶标仪和高内涵成像系统。其较宽的动态检测范围和快速的钙响应动力学，使其既适用于激动剂模式的EC₅₀测定，也适用于拮抗剂模式的IC₅₀评估。

三、试剂盒组分与规格

本试剂盒提供三种规格，分别对应单板、10板及100板（以96孔板计）的通量需求，灵活适配不同规模的筛选项目。各规格组分如下：

36317（1板规格）

-组分A：Calbryte™ 520 AM冻干粉，1管

-组分B：10× Pluronic® F127 Plus助溶溶液，1管（1 mL）

-组分C：HHBS缓冲液（Hanks平衡盐溶液含20 mM Hepes），1管（9 mL）

36318（10板规格）

-组分A：Calbryte™ 520 AM冻干粉，1管

-组分B：10× Pluronic® F127 Plus助溶溶液，1瓶（10 mL）

-组分C：HHBS缓冲液，1瓶（100 mL）

36319（100板规格）

-组分A：Calbryte™ 520 AM冻干粉，10管

-组分B：10× Pluronic® F127 Plus助溶溶液，10瓶（10 mL/瓶）

-组分C：HHBS缓冲液，10瓶（100 mL/瓶）

注：实际组分C在36318规格产品说明中重复列出一次，实际以一瓶100 mL为准。Pluronic® F127 Plus为优化型非离子表面活性剂，用于辅助AM探针在水相中的分散和细胞负载效率。

四、适用场景与操作要点

本试剂盒特别适用于以下场景：对脆弱的细胞系（如神经元、原代培养细胞、干细胞分化来源细胞）进行GPCR和钙通道的功能筛选；自动化高通量筛选平台上的大规模化合物库评价；以及需避免丙磺舒干扰的特定信号通路研究。建议在操作中严格控制染料负载时间和温度（通常37℃孵育30～90分钟），并避免反复冻融探针溶液以保证批次间一致性。

综上所述，Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒免洗式钙离子检测试剂盒通过创新的探针设计和精简的操作流程，有效解决了传统钙流检测中染料外排、操作繁琐以及丙磺舒细胞毒性等痛点，为药物发现阶段的GPCR筛选提供了高效、可靠且易于自动化的解决方案。其多规格配置也使得从小规模方法开发到大规模化合物筛选的无缝衔接成为可能，是功能活性筛选实验室值得纳入的方法工具箱中的重要成员。

文献参考：

Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM

Authors: Barreto-Chang OL, Dolmetsch RE.

Journal: J Vis Exp. (2009)

A flow cytometric comparison of Indo-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux

Authors: Bailey S, Macardle PJ.

Journal: J Immunol Methods (2006): 220

Measurement of [Ca2+]i in whole cell suspensions using fura-2

Authors: Hirst RA, Harrison C, Hirota K, Lambert DG.

Journal: Methods Mol Biol (2006): 37

Load of calcium probe Fura -2/AM in Escherichia coli cells

Authors: Shao M, Wang HM, Liu ZH, Shen P, Cai RX.

Journal: Wei Sheng Wu Xue Bao (2005): 805

Fluorescence measurements of free [Mg2+] by use of mag-fura 2 in Salmonella enterica

Authors: Froschauer EM, Kolisek M, Dieterich F, Schweigel M, Schweyen RJ.

Journal: FEMS Microbiol Lett (2004): 49