Screen Quest™ 荧光法葡萄糖摄取分析试剂盒现货，促销尝鲜

一、背景与检测原理

葡萄糖转运系统是细胞维持能量代谢和物质代谢平衡的核心枢纽。葡萄糖通过细胞膜上的葡萄糖转运蛋白（GLUT家族）进入胞内，为糖酵解、磷酸戊糖途径及糖原合成等代谢通路提供底物。在糖尿病、胰岛素抵抗、肿瘤代谢重编程以及心血管疾病等研究领域，准确测定细胞或组织对葡萄糖的摄取能力，是评估代谢功能和药物干预效果的关键指标。

传统上，2-脱氧葡萄糖（2-DG）摄取法是应用最广泛的葡萄糖摄取定量方法。2-DG为葡萄糖的类似物，可被葡萄糖转运蛋白识别并摄入胞内，但其在胞内经己糖激酶磷酸化生成2-DG-6-磷酸（2-DG6P）后，由于结构差异无法被进一步代谢，从而在细胞内累积。通过测定累积的2-DG6P含量，即可间接反映葡萄糖的摄取水平。经典方案多采用氚（³H）或碳-14（¹⁴C）标记的2-DG作为示踪物，但放射性同位素方法存在明显局限：试剂成本高昂、需特殊防护和废弃物处理资质、实验通量低且操作繁琐，难以满足现代药物筛选和代谢研究中高频次、高通量的检测需求。

由艾美捷代理AAT Bioquest推出的Screen Quest™荧光法葡萄糖摄取检测试剂盒，货号：AAT-36500，提供了一套灵敏、无放射性的全荧光替代方案。其核心原理如下：细胞经2-DG孵育后，摄取进入胞内的2-DG被磷酸化为2-DG6P并累积；随后裂解细胞释放2-DG6P，利用特定酶偶联反应将其氧化，同时产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）；体系中含有的荧光NADPH传感器可特异性识别NADPH，产生与NADPH浓度成正比的荧光信号（激发/发射波长约为540/590 nm）。最终通过荧光酶标仪读取信号，即可定量出细胞的葡萄糖摄取活性。该方法的灵敏度足以检测低至微摩尔级别的2-DG6P，且全程无需放射性同位素操作，既安全又便于自动化。

二、试剂盒组分与规格

本试剂盒提供两种规格，分别适配100次和500次检测（以96孔板计），满足从方法学开发到规模化筛选的不同需求。具体组分如下：

36500（100次规格）

-组分A：2-脱氧葡萄糖（2-DG，10 mM），1管（1 mL）

-组分B：葡萄糖摄取缓冲液，1瓶（10 mL）

-组分C：酸性裂解液，1瓶（2.5 mL）

-组分D：中和缓冲液，1瓶（2.5 mL）

-组分E：酶探针（冻干粉），1瓶

-组分F：检测缓冲液，1瓶（5 mL）

-组分G：NADP，1管

-组分H：5× KRPH缓冲液，1瓶（20 mL）

36501（500次规格）

-组分A：2-脱氧葡萄糖，1瓶（5 mL）

-组分B：葡萄糖摄取缓冲液，1瓶（50 mL）

-组分C：酸性裂解液，1瓶（12.5 mL）

-组分D：中和缓冲液，1瓶（12.5 mL）

-组分E：酶探针（冻干粉），5瓶

-组分F：检测缓冲液，1瓶（25 mL）

-组分G：NADP，5管

-组分H：5× KRPH缓冲液，1瓶（100 mL）

其中，5× KRPH缓冲液（含Krebs-Ringer磷酸盐缓冲液及Hepes）用于细胞孵育和预处理，需稀释至1×工作浓度后使用；酸性裂解液和中和缓冲液配套使用，用于终止细胞反应并释放胞内2-DG6P；NADP作为酶偶联反应的辅因子，与酶探针共同构成NADPH产生体系。各组分均需按说明书要求储存（通常为-20℃或4℃），冻干酶探针在溶解后建议分装保存以避免反复冻融。

三、操作流程与关键注意事项

典型的检测流程包括以下步骤：

1. 细胞准备：将待测细胞接种于96孔或384孔板，培养至适宜密度（通常为80%～90%融合度）。对于贴壁细胞，可直接在培养板上操作；悬浮细胞则需离心后重悬于KRPH缓冲液中。

2. 饥饿处理（可选）：为消除培养基中葡萄糖的竞争性干扰，建议用KRPH缓冲液（含0.1% BSA）替换培养基，饥饿0.5～2小时。

3. 2-DG负载：加入2-DG工作液（终浓度一般为1～10 mM），于37℃孵育指定时间（通常15～60分钟）。该步骤中2-DG通过葡萄糖转运蛋白进入胞内并被磷酸化累积。

4. 洗涤与裂解：迅速弃去含2-DG的上清，用预冷KRPH缓冲液洗涤细胞以终止摄取，随后加入酸性裂解液使细胞裂解并释放2-DG6P。

5. 中和与检测：加入中和缓冲液调节pH至中性，再加入含酶探针、NADP和检测缓冲液的工作液，室温孵育后于荧光酶标仪读取信号（激发540 nm/发射590 nm）。

操作要点：① 建议设置背景对照孔（不含细胞或不加2-DG）以扣除本底信号；② 对于胰岛素刺激实验，可在2-DG负载前加入胰岛素（通常10～100 nM）孵育10～30分钟；③ 若待测化合物本身具有荧光干扰，需增设化合物空白孔进行校正；④ 酶反应时间需保持批内一致，通常为30～60分钟以确保反应处于线性范围。

四、适用场景与技术优势

本试剂盒广泛适用于：筛选GLUT转运蛋白的激动剂或抑制剂；评价胰岛素或胰岛素增敏剂对细胞葡萄糖摄取的影响；比较不同细胞系（如L6肌管、3T3-L1脂肪细胞、原代肝细胞）的代谢特征；以及病理状态下（如高糖或炎症因子诱导）的葡萄糖摄取异常研究。

相较于放射性同位素法，其优势集中体现在：无辐射安全风险，普通实验室即可操作；读板模式支持动力学或终点法检测，易于实现高通量；检测灵敏度媲美同位素法，且批间变异可控。与市面上部分基于2-NBDG荧光葡萄糖类似物的方法相比，本试剂盒检测的是累积代谢产物而非瞬时摄取，因此信号更稳定，对短时间摄取差异的分辨力更强。

综上所述，Screen Quest™荧光法葡萄糖摄取检测试剂盒凭借无放射性的安全设计、简洁的裂解-中和-荧光检测流程以及两种通量规格的灵活配置，为代谢研究领域提供了一套稳健、易用且可规模化的葡萄糖摄取定量工具，是糖尿病药物发现和基础代谢机制研究中的得力辅助方法。

文献参考：

Inhibition of the sodium glucose co-transporter-2: its beneficial action and potential combination therapy for type 2 diabetes mellitus

Authors: Chen LH, Leung PS.

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Hepatic expression and cellular distribution of the glucose transporter family

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Regulation of glucose transporter translocation in health and diabetes

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Glucose transporter type I deficiency syndrome: epilepsy phenotypes and outcomes

Authors: Pong AW, Geary BR, Engelstad KM, Natarajan A, Yang H, De Vivo DC.

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